Genscreen ULTRA HIV Ag-Ab 1 pločica 96 72386 5 pločica 480 72388 KOMPLET ZA PROBIRNI TEST OTKRIVANJA HIV P24 ANTIGENA I PROTUTIJELA NA HIV-1 I HIV-2 U LJUDSKOM SERUMU/PLAZMI IMUNOENZIMSKIM TESTOM 883637 2013/10 1 [HR]
SADRŽAJ 1. NAMJENA... 3 2. SAŽETAK I OBJAŠNJENJE TESTA... 3 3. NAČELA POSTUPKA... 3 4. REAGENSI... 4 5. UPOZORENJA I MJERE OPREZA... 5 6. UZORCI... 7 7. POSTUPAK... 7 8. OGRANIČENJE TESTA... 10 9. KARAKTERISTIKE IZVEDBE... 11 10. BIBLIOGRAFSKE REFERENCE.... 14 2 [HR]
1. NAMJENA Genscreen ULTRA HIV Ag-Ab kvalitativni je komplet imunoenzimskih testova za otkrivanje HIV p24 antigena i protutijela na HIV-1 (grupe M i O) i HIV-2 u ljudskom serumu ili plazmi. Komplet se može koristiti za HIV Ag i HIV Ab probir donacija krvi te za dijagnostičku. 2. SAŽETAK I OBJAŠNJENJE TESTA Sindrom stečene imunodeficijencije (AIDS) zarazna je bolest uzrokovana virusom, a njezina je značajka jako oslabljen imunitet. Dvije vrste virusa povezane sa skupinom lentivirusa izolirane su iz limfocita bolesnika koji boluju od AIDS-a ili njegovih prodroma. Prvi, pod nazivom HIV-1, izoliran je u Francuskoj, a zatim u Sjedinjenim Državama. Drugi, pod nazivom HIV-2, izoliran je iz dva pacijenta koji žive u Africi te je dokazano da je odgovoran za novo žarište AIDS-a u Zapadnoj Africi. Spoznaje o genskoj raznolikosti sojeva virusa HIV dobivene su sekvencioniranjem gena GAG, POL i ENV reprezentativnih sojeva svakog podtipa. Virusi HIV-1 podijeljeni su u 2 grupe: grupa M, koja uključuje 9 podtipova (A do I) i grupa O. Virus HIV-2 uključuje 5 podtipova. Geografska raspodjela različitih podtipova sada je prilično dobro definirana. Neke varijante virusa HIV-1 imaju samo 70% podudarnosti za gene GAG i POL s glavnim izolatima i samo 50% za gen ENV; tim se razlikama može objasniti neuspjeh dijagnosticiranja infekcije u nekih pacijenata. Razni izolati virusa HIV-2 dijele zajedničke antigene s virusom imunodeficijencije kod majmuna (SIV) u svim proteinima (proteini ovojnice i proteini jezgre: heterologija = 30%), no pokazuju manje od 40% homologije s proteinima ovojnice virusa HIV-1. HIV antigeni i protutijela pojavljuju se i mogu se otkriti u različitim fazama serokonverzije i infekcije. Genscreen ULTRA HIV Ag-Ab omogućuje istovremeno otkrivanje anti-hiv-1 (grupe M i O) i anti-hiv-2 protutijela i antigena (također vidi Ograničenje postupka). 3. NAČELA POSTUPKA Genscreen ULTRA HIV Ag-Ab kvalitativni je imunoenzimski test koji se temelji na načelu "sendvič" tehnike za otkrivanje HIV antigena i raznih protutijela povezanih s virusom HIV-1 i/ili HIV-2 u ljudskom serumu ili plazmi. Čvrsta faza obložena je: Monoklonskim protutijelima protiv p24 HIV-1 antigena Pročišćenim antigenima: gp160 rekombinirani protein, sintetički peptid koji imitira potpuno umjetni (tj. kojega ne kodira nijedan postojeći virus) epitop virusa HIV-1 specifičan za grupu O i peptid koji imitira imunodominantni epitop proteina ovojnice virusa HIV-2. Konjugati se temelje na upotrebi: Biotiniziranih poliklonskih protutijela za HIV Ag (konjugat 1) Streptavidina i HIV antigena - konjugat peroksidaze (gp41 i gp36 peptidi koji imitiraju imunodominantne epitope glikoproteina ovojnice virusa HIV-1 i HIV-2 i isti sintetski peptid koji imitira potpuno umjetni epitop virusa HIV-1 specifičan za grupu O korišten za čvrstu fazu) (konjugat 2). Testni postupak uključuje sljedeće korake: 1. Konjugat 1 (biotinizirana poliklonska protutijela za p24 HIV-1 Ag) dodaje se u jažice mikrotitarske pločice. 2. Uzorci seruma za analizu i kontrole pipetiraju se u jažice. Ako su prisutni, HIV antigeni vežu se s monoklonskim protutijelima koja su vezana za čvrstu fazu i konjugat 1. Protutijela za HIV-1 i/ili HIV-2, ako postoje, vežu se za antigene imobilizirane na čvrstoj fazi. Dodavanje konjugata 1 i uzorka potvrđuje se promjenom boje, od žuto-zelene do plave. 3. Nakon inkubacije na temperaturi od 37 C i ispiranja, dodaje se konjugat 2: Streptavidin reagira s biotiniziranim Ab-Ag-Ab kompleksima. Peroksidazom označeni, pročišćeni HIV-1 i HIV-2 antigeni naizmjenično se vežu s IgG, IgM ili IgA protutijelima izdvojenima na čvrstoj fazi. 4. Nakon inkubacije na temperaturi između 18-30 C nevezani dio konjugata 2 uklanja se ispiranjem. Nakon inkubacije u prisutnosti supstrata na sobnoj temperaturi (18-30 C), prisutnost vezanog konjugata vidljiva je promjenom boje. 5. Reakcija se zaustavlja i apsorpcija se očitava korištenjem spektrofotometra pri 450/620-700 nm. Apsorpcija izmjerena na uzorku određuje prisutnost ili odsutnost HIV Ag ili HIV-1 i/ili HIV-2 protutijela. 3 [HR]
4. REAGENSI 4.1. Opis R1 R2 R3 R4 R5 Tekst na oznaci Microplate Concentrated washing solution (20X) Negative control HIV Ab positive control HIV Ag positive control R6 Conjugate 1 R7a Conjugate 2 R7b R8 R9 R10 Conjugate 2 diluent Substrate buffer Chromogen: TMB solution (11X) Stopping solution Opis Mikrotitarska pločica 12 traka s 8 jažica obloženih monoklonskim protutijelima za p24 HIV-1 (miš) i pročišćenim HIV-1 i HIV-2 antigenima Specifični ID broj = 53. Koncentrat sredstva za ispiranje (20x) Tris NaCl pufer ph 7,4 Konzervans: ProClin 300 0,04% Negativna kontrola Toplinom inaktivirana ljudska plazma negativna na HBs antigen, HIV antigen, anti- HIV-1, anti-hiv-2 i anti-hcv protutijela Konzervans: Natrijev azid < 0,1% HIV Ab pozitivna kontrola Toplinom inaktivirana ljudska plazma pozitivna na anti-hiv protutijela, negativna na HBs antigen i anti-hcv protutijela, u sintetskom razrjeđivaču Konzervans: ProClin 300 < 0,1% HIV Ag pozitivna kontrola Pročišćeni HIV-1 antigen inaktiviran kaotropnim sredstvom, u sintetskom razrjeđivaču Konzervans: ProClin 300 < 0,1 % Konjugat 1 Biotinizirana poliklonska protutijela na p24 HIV- 1 (ovca), žuto-zelene boje Konzervans: ProClin 300 0,5% Konjugat 2 Streptavidin označen liofiliziranom peroksidazom i pročišćeni HIV-1 i HIV-2 antigeni Konzervans: ProClin 300 < 0,1% Razrjeđivač za konjugat 2 Otopina obranog mlijeka obojena crveno Konzervans: ProClin 300 0,5% Pufer supstrata Limunska kiselina i otopina natrij-acetata, ph 4,0, sadrži H 2 O 2 (0,015%) i dimetil sulfoksid DMSO (4%) Kromogen: TMB otopina (11X) Otopina sadrži 3,3, 5,5 tetrametilbenzidina (TMB) Otopina za zaustavljanje Otopina sumporne kiseline (H 2 SO 4 1N) Prezentacija/Priprema 72386 72388 1 pločica 70 ml Treba razrijediti 2,5 ml 1 ml 1 ml 10 ml q.s.ad 12,5 ml Treba rekonstituirati 12,5 ml Treba rekonstituirati 60 ml Treba rekonstituirati 5 ml Treba rekonstituirati 28 ml 5 pločica 235 ml Treba razrijediti 2,5 ml 1 ml 1 ml 2 bočice 2 x 10 ml 2 bočice q.s.ad 2 x 30 ml Treba rekonstituirati 2 bočice 2 x 30 ml Treba rekonstituirati 2 bočice 2 x 60 ml Treba rekonstituirati 2 bočice 2 x 5 ml Treba rekonstituirati 3 bočice 3 x 28 ml 4 [HR]
4.2. Skladištenje i rukovanje Komplet treba čuvati na temperaturi od +2-8 C. Svaki pojedini dio kompleta koji se čuva na temperaturi od +2-8 C može se koristiti sve do isteka roka trajanja naznačenog na pakiranju (osim ako nije drukčije naznačeno). Nakon otvaranja i uz odsutnost kontaminacije, reagensi R2, R3, R4, R6, R7, R8, R9 i R10 koji su se čuvali na temperaturi od +2-8 C mogu se koristiti do isteka roka trajanja naznačenog na etiketi. Identifikacija R1 R2 R7a + R7b R8 + R9 Čuvanje Nakon otvaranja vakuumski zatvorene vrećice, trake mikrojažica čuvane na temperaturi od +2-8 C mogu se koristiti mjesec dana u izvornoj vrećici koja je pažljivo zatvorena. Razrijeđena otopina za ispiranje može se čuvati 2 tjedna na temperaturi od +2-30 C. Koncentrirana otopina za ispiranje (R2) može se čuvati na temperaturi od +2-30 C. Nakon rekonstitucije reagensi se mogu čuvati 1 mjesec na temperaturi od +2-8 C. Nakon rekonstitucije u zamrznutom stanju, pa sve do isteka roka trajanja, može se zamrznuti i zatim odmrznuti do 11 puta. Nakon rekonstitucije reagens čuvan u tami može se koristiti 6 sati na sobnoj temperaturi (18-30 C). 5. UPOZORENJA I MJERE OPREZA Za in vitro dijagnostiku. Za profesionalnu zdravstvenu. 5.1. Zdravstvene i sigurnosne mjere Ovim testnim kompletom treba rukovati samo kvalificirano osoblje koje je upoznato s laboratorijskim procedurama i s njima povezanim potencijalnim rizicima. Nosite odgovarajuću zaštitnu odjeću, rukavice, zaštitu za oči/lice te rukujte na odgovarajući način uz potrebnu primjenu dobre laboratorijske prakse. Testni komplet sadrži sastojke ljudske krvi. Materijal ljudskog porijekla korišten u pripremi negativne kontrole (R3) testiran je te je utvrđeno kako ne reagira s hepatitis B površinskim antigenom (HBs Ag), HIV antigenom, protutijelima na hepatitis C i protutijelima na virus humane imunodeficijencije (HIV-1 i HIV-2). Materijal ljudskog porijekla korišten u pripremi pozitivne kontrole HIV-1 protutijela (R4) testiran je te je utvrđeno kako ne reagira s hepatitis B površinskim antigenom (HBs Ag) i protutijelima na hepatitis C. Niti jedna poznata metoda testiranja ne može ponuditi potpunu sigurnost kad je riječ o nepostojanju infektivnih agensa. Zato se svi derivati ljudske krivi, reagensi i ljudski uzorci trebaju tretirati kao da mogu prenijeti zarazne bolesti, te slijediti preporučene univerzalne mjere opreza za patogene koji se prenose putem krvi, definirane od strane lokalnih, regionalnih i nacionalnih organa vlasti. Proliveni biološki materijali: Proliveni ljudski polazni materijal treba se tretirati kao potencijalno zarazan. Prolivene sadržaje koji ne sadrže kiseline treba odmah dekontaminirati, uključujući i mjesto na kojem su proliveni, kao i kontaminiranu površinu i opremu, odgovarajućim kemijskim dezinficijensom koji je učinkovit protiv potencijalnih biološki opasnih tvari ovisno o vrsti prolivenih uzoraka (obično 1:10 razrijeđeni kućni izbjeljivač, 70-80% etanol ili izopropanol, jodofor, kao npr. 0,5% Wescodyne Plus itd.) te osušiti brisanjem. Prolivene sadržaje koji sadrže kiseline treba adekvatno apsorbirati (obrisati) ili neutralizirati, područje treba isprati vodom i osušiti brisanjem; materijale korištene za apsorbiranje prolivenog sadržaja mogu trebati zbrinjavanje kao biološki opasan otpad. Tada područje treba dekontaminirati nekim od kemijskih dezinficijensa. NAPOMENA: Ne stavljajte otopinu koja sadrži izbjeljivač u autoklav! 5 [HR]
Sve uzorke i materijale korištene prilikom izvođenja testa zbrinite na odgovarajući način jer mogu sadržavati infektivni agens. Laboratorijskim, kemijskim ili biološki opasnim otpadom mora se rukovati i zbrinuti ga u skladu s lokalnim, regionalnim i nacionalnim zakonima. Za preporuke o rizicima i mjerama opreza povezanim s nekim kemijskim spojevima u ovom testnom kompletu, molimo pogledajte piktogram(e) na naljepnici te dostavljene informacije na kraju uputa za upotrebu. Sigurnosno-tehnički list dostupan je na www.bio-rad.com. 5.2. Mjere opreza povezane s postupkom 5.2.1. Priprema Pouzdanost rezultata ovisi o ispravnoj primjeni sljedeće dobre laboratorijske prakse: Ne koristite reagense kojima je istekao rok trajanja. Ne miješajte i ne povezujte reagense iz različitih lotova u okviru serije testiranja. Prije uporabe pričekajte 30 minuta da se reagensi stabiliziraju na sobnoj temperaturi (18-30 C). Naziv testa, kao i specifični identifikacijski broj testa, napisan je na okviru svake mikrotitarske pločice. Ovaj specifični identifikacijski broj nalazi se i na svakoj traci. Genscreen ULTRA HIV Ag-Ab: Specifični ID broj = 53 Potvrdite specifični identifikacijski broj prije uporabe. Ako identifikacijski broj nedostaje ili se razlikuje od broja koji odgovara testu koji se koristi, tada traku ne bi trebalo koristiti. NAPOMENA: Za otopinu za ispiranje (R2, identifikacijska oznaka: 20X zelene boje), pufer supstrata peroksidaze (R8, identifikacijska oznaka: TMB pufer, plave boje), kromogen (R9, identifikacijska oznaka: TMB 11X, ljubičaste boje) i otopinu za zaustavljanje (R10, identifikacijska oznaka: 1N, crvene boje) moguće je koristiti druge lotove od onih sadržanih u kompletu, ako se isti lot koristi u okviru određenog testiranja. Ovi reagensi mogu se koristiti s drugim proizvodima naše tvrtke. Za detaljne informacije kontaktirajte našu tehničku službu. Pažljivo rekonstituirajte reagens izbjegavajući bilo koji oblik kontaminacije. Koristite posude od stakla koje su dobro oprane i isprane deioniziranom vodom ili, poželjno, materijal za jednokratnu. Ne dozvolite mikrotitarskoj pločici da se osuši u vremenu između kraja pranja i raspodjele reagensa. Raspodjela uzoraka mora započeti odmah nakon raspodjele konjugata 1. Vrijeme čekanja između dodavanja konjugata 1 i uzoraka ne smije biti dulje od 30 minuta. Enzimska reakcija jako je osjetljiva na metalne ione. Stoga, ne dozvolite metalnim elementima da dođu u kontakt s različitim konjugatima ili otopinama supstrata. Razvojna otopina (pufer supstrata + kromogen) mora biti ružičaste boje. Promjena ružičaste boje unutar nekoliko minuta od rekonstitucije znači da se reagens ne smije koristiti te se mora zamijeniti. Priprema razvojne otopine može se učiniti u čistoj jednokratnoj plastičnoj posudi ili staklenom spremniku koji prvo treba oprati s pomoću 1N HCl te dobro isprati s destiliranom vodom i osušiti. Ovaj reagens mora se čuvati u tami. Nikad ne koristite isti spremnik za raspodjelu konjugata i za razvojnu otopinu. 5.2.2. Obrada Ne mijenjajte postupak testa. Ne obavljajte testiranje u prisustvu reaktivnih para (kiselinskih, alkalnih, aldehidskih para) ili prašine koja može izmijeniti enzimsku aktivnost konjugata. Koristite novi nastavak za raspodjelu svakog uzorka. Dobro ispiranje ključni je korak u ovom postupku, stoga se pridržavajte preporučenog broja ciklusa ispiranja i vodite računa da su sve jažice potpuno ispunjene i zatim potpuno ispražnjene. Neispravno ispiranje može rezultirati netočnim rezultatima. Pažljivo slijedite opisan postupak ispiranja kako bi dobili najbolju izvedbu testa. Kod nekih instrumenata bit će potrebno optimizirati proceduru ispiranja (povećati broj ciklusa ispiranja i/ili obujam pufera za pranje u svakom ciklusu) radi postizanja prihvatljive razine OD pozadine za negativne uzroke. Kontaktirajte našu tvrtku za prilagodbe i posebne postupke. 6 [HR]
6. UZORCI Prikupite krvne uzorke prema trenutačnoj praksi. Testiranje se treba izvršiti s nerazrijeđenim serumom ili plazmom (prikupljenom na EDTA, heparinu, citratu ili antikoagulansima temeljenim na ACD-u). Što prije odvojite serum ili plazmu od ugruška ili crvenih krvnih stanica kako bi se izbjegla hemoliza. Opsežna hemoliza može utjecati na uspješnost testa. Uzorci koji sadrže agregate moraju se pročistiti centrifugiranjem prije testiranja. Preostale čestice fibrina ili agregata mogu dati lažno pozitivne rezultate. Uzorci se mogu čuvati na temperaturi od +2-8 C ako se probir provede u roku od 7 dana ili se mogu zamrznuti na temperaturi od -20 C na nekoliko mjeseci. Plazma se mora brzo odmrznuti grijanjem u vodenoj kupelji na temperaturi od 40 C nekoliko minuta (kako bi se izbjeglo taloženje fibrina). Nemojte ponoviti više od 3 ciklusa zamrzavanja/odmrzavanja. Uzorci koji sadrže do 90 g/l albumina, 200 mg/l bilirubina, 50 µg/l biotina, lipemični uzorci koji sadrže do 36 g/l triglicerida i hemolizirani uzorci koji sadrže do 10 g/l hemoglobina ne utječu na rezultate. Međutim, ne preporučuje se koristiti kontaminirane hiperlipidemične i hiperhemolizirane uzorke seruma ili plazme. Ne preporučuje se zagrijavati uzorke. Ako se uzorke treba otpremiti, treba ih zapakirati u skladu s propisima važećim za prijevoz etioloških agensa te se preporučuje prevoziti ih zamrznute. 7. POSTUPAK 7.1. Potrebni materijal koji nije dostavljen Destilirana voda. Natrijev hipoklorit (izbjeljivač za primjenu u kućanstvima) i natrijev bikarbonat. Upijajući papir. Rukavice za jednokratnu. Adhezivna folija Zaštitne naočale Epruvete za jednokratnu Automatske ili poluautomatske, podesive ili prethodno podešene pipete ili višestruke pipete za mjerenje i pipetiranje 25 µl, 75 µl, 80 µl i 100 µl. Graduirani cilindri kapaciteta 25 ml, 100 ml i 1000 ml. Vortex mješalica. Automatski, poluautomatski ili ručni sustav za ispiranje mikrotitarskih pločica (*). Vodena kupelj ili ekvivalentni inkubator za mikrotitarske pločice, termostatski podešen na temperaturu od 37 C ± 1 C (*). Spremnik za biološki opasan otpad. Čitač mikrotitarske pločice s filterima od 450 nm, 490 nm i 620-700 nm (*). (*) Posavjetujte se s nama vezano za detaljne informacije o opremi koju preporučuje naš tehnički odjel. 7.2. Priprema reagensa 7.2.1. Reagensi spremni za Reagens 1 (R1): Mikrotitarska pločica Svaki okvir koji sadrži 12 traka umotan je u zatvorenu vrećicu od folije. Razrežite vrećicu pomoću škara ili skalpela i to 0,5 do 1 cm iznad ruba vakuumiranja. Otvorite vrećicu i izvadite okvir. Nekorištene trake vratite natrag u vrećicu. Pažljivo zatvorite vrećicu i vratite je natrag na čuvanje pri temperaturi od +2-8 C. Reagens 3 (R3): Negativna kontrola Reagens 4 (R4): HIV Ab pozitivna kontrola Reagens 5 (R5): HIV Ag pozitivna kontrola Reagens 6 (R6): Konjugat 1 Reagens 10 (R10): Otopina za zaustavljanje 7 [HR]
7.2.2. Reagensi za rekonstituciju Reagens 2 (R2): Koncentrat sredstva za ispiranje (20x) Razrijedite 1:20 u destiliranoj vodi za dobivanje otopine spremne za ispiranje. Pripremite 800 ml za jednu pločicu s 12 traka. Reagens 7a (R7a) + Reagens 7b (R7b): Radna otopina konjugata 2 Lagano dodirnite posudicu liofiliziranog konjugata 2 (R7a) na radnoj površini da biste uklonili moguće ostatke tvari s gumenog čepa. Polagano skinite čep i izlijte sadržaj bočice s razrjeđivačem konjugata (R7b) u bočicu s liofiliziranim konjugatom (R7a). Stavite čep i pustite da odstoji 10 minuta te s vremena na vrijeme protresite i okrenite posudicu radi lakšeg otapanja. Reagens 8 (R8) + Reagens 9 (R9): Enzimska razvojna otopina Razrijedite 1:11 kromogena (R9) u puferu supstrata (R8) (npr. 1 ml reagensa R9 + 10 ml reagensa R8), s tim da je 10 ml neophodno i dovoljno za tretiranje 12 traka. Homogenizirajte. 7.3. Postupak analize Strogo se pridržavajte postupka. Koristite negativnu (R3), HIV-1 Ab pozitivnu (R4) i HIV Ag pozitivnu (R5) kontrolu za svaku seriju određivanja radi potvrđivanja kvalitete testa. Slijedite sljedeću dobru laboratorijsku praksu: 1) Pažljivo utvrdite raspodjelu uzoraka i plan identifikacije. 2) Pripremite razrijeđenu otopinu za ispiranje R2 i radnu otopinu konjugata 2 (R7a + R7b) (pogledajte 7.2). 3) Izvadite iz zaštićenog pakiranja podržni okvir i potreban broj traka (R1). Neiskorištene trake vratite natrag u pakiranje. Zatvorite pakiranje i pohranite ga pri temperaturi od +2-8 C. 4) Rasporedite ih u jažice prema sljedećem rasporedu, bez prethodnog ispiranja pločice (preporučena raspodjela pločice): 25 µl konjugata 1 (R6) u svaku jažicu 75 µl HIV Ag pozitivne kontrole (R5) u jažicu A1 75 µl HIV Ab pozitivne kontrole (R4) u jažicu B1, 75 µl negativne kontrole (R3) u jažice C1, D1 i E1 75 µl uzorka 1 u jažicu F1 75 µl uzorka 2 u jažicu G1 itd. Homogenizirajte mješavinu s barem 3 aspiracije s pomoću pipete od 75 µl ili s treskalicom mikrotitarske pločice tijekom 5 sekundi. Raspodjela uzoraka mora započeti odmah nakon raspodjele konjugata 1. Ako raspodjela uzoraka traje duže od 30 minuta, preporučuje se da raspodijelite negativne i pozitivne kontrole nakon uzoraka koji će se testirati. Ovisno o korištenom sustavu, moguće je izmijeniti položaj kontrola ili redoslijed raspodjele. NAPOMENA: Nakon raspodjele uzoraka jažica koji sadrži konjugat 1 postaje žuto-zelena ili plava. Moguće je potvrditi prisutnost (uzorak + konjugat 1) u jažicama pomoću spektrofotometričkog očitanja pri 620 nm (pogledajte 7.7). 5) Kada je to moguće, prekrijte mikrotitarsku pločicu novom adhezivnom folijom. Čvrsto pritisnite po cijeloj pločici, kako biste osigurali čvrsto prijanjanje. 6) Inkubirajte mikrotitarsku pločicu 1 sat (± 4 min) pri temperaturi od 37 C ± 1 C u vodenoj kupelji kontroliranoj termostatom ili inkubatoru za mikropločice. 7) Ako je potrebno, uklonite adhezivnu foliju. Aspirirajte sadržaj svih otvora u spremnik za tekući otpad (koji sadrži natrijev hipoklorit). U svaku jažicu dodajte minimalno 370 µl otopine za ispiranje. Dozvolite vrijeme natapanja od najmanje 30 sekundi. Aspirirajte ponovo. Ponovite ispiranje najmanje 2 puta (tj. ukupno minimalno tri pranja). Preostali volumen mora biti manji od 10 µl (ako je potrebno, osušite trake okretanjem naopako na upijajući papir). Ako imate automatsku perilicu, slijedite isti postupak. 8) Brzo raspodijelite 100 µl konjugata 2 (R7a + R7b) u svaku jažicu na pločici. Konjugat treba lagano protresti prije uporabe. Ako je moguće, prekrijte novom adhezivnom folijom i inkubirajte 30 minuta (± 4 min) na sobnoj temperaturi (18-30 C). NAPOMENA: Konjugat 2 je crvene boje. Moguće je potvrditi prisutnost konjugata 2 u jažicama pomoću spektrofotometrijskog očitanja pri 620 nm (pogledajte 7.7). 8 [HR]
9) Po potrebi uklonite adhezivnu foliju, ispraznite sve jažice aspiriranjem te isperite najmanje 5 puta kao što je prethodno opisano. 10) Pripremite enzimsku razvojnu otopinu (reagens R8 + R9). 11) Brzo rasporedite 80 µl pripremljene enzimske razvojne otopine (R8 + R9) u sve jažice. Dozvolite da se reakcija razvije u mraku u vremenu od 30 minuta (± 4 min) na sobnoj temperaturi (18-30 C). Tijekom ove inkubacije ne koristite adhezivnu foliju. NAPOMENA: Raspodjela razvojne otopine, koja je ružičaste boje, može se vizualno kontrolirati u ovom koraku rada. Jasno se uočava razlika u boji između prazne jažice i pune jažice koja sadrži ružičastu otopinu supstrata. (pogledajte 7.7) 12) Dodajte 100 µl otopine za zaustavljanje (R10) koristeći isti redoslijed i istu brzinu raspodjele kao i za razvojnu otopinu. NAPOMENA: Raspodjela bezbojne otopine za zaustavljanje može se vizualno kontrolirati na ovoj razini rukovanja. Boja supstrata, ružičasta (za negativne uzorke) ili plava (za pozitivne uzorke), blijedi u jažicama, koje postaju bezbojne (za negativne kontrole) ili žute (za pozitivne kontrole) nakon dodavanja otopine za zaustavljanje. 13) Pažljivo obrišite dno svake pločice. Pričekajte barem 4 minute nakon dodavanja otopine za zaustavljanje i unutar 30 minuta od zaustavljanja reakcije očitajte optičku gustoću pri 450/620-700 nm pomoću čitača pločice. 14) Provjerite slaganje između spektrofotometrijskog i vizualnog očitavanja, u skladu s pločicom i raspodjelom uzoraka te planom identifikacije. 7.4. Kontrola kvalitete Koristite pozitivne i negativne kontrole u svakoj seriji radi potvrde analize. (Pogledajte 7.5) 7.5. Kriteriji za validaciju testa Ovaj je test potvrđen ako se poštuju uvjeti u nastavku: 1) Za negativnu kontrolu R3 Apsorpcija svake negativne kontrole (R3) treba biti manja od 0,170: O.D. R3 < 0,170 Srednja vrijednost apsorpcije negativnih kontrola (R3) treba biti manja od 0,150: O.D. R3 < 0,150 Ako jedna od negativnih kontrola R3 nije u skladu s tom normom, zanemarite tu vrijednost i ponovno izračunajte srednju vrijednost korištenjem preostalih dviju vrijednosti. 2) Za pozitivnu kontrolu HIV protutijela R4 Apsorpcija HIV Ab pozitivne kontrole (R4) treba biti veća od 0,9: O.D. R4 > 0,9 3) Za pozitivnu kontrolu HIV antigena R5 Apsorpcija HIV Ab pozitivne kontrole (R5) treba biti veća od 0,9: O.D. R5 > 0,9 7.6. Izračun/interpretacija rezultata Granična (cut-off) vrijednost određena je pomoću R3 negativne kontrole: Izračunajte srednju izmjerenu vrijednost apsorpcije za negativnu kontrolu R3. OD (C1) + OD (D1) + OD (E1) OD R3 = 3 Izračunajte graničnu vrijednost: CO = OD R3 + 0,200 9 [HR]
Prisutnost ili odsutnost HIV antigena ili protutijela na HIV-1 i/ili HIV-2 koje je moguće otkriti određuje se usporedbom apsorpcije izmjerene za svaki uzorak s izračunatom graničnom vrijednosti. Sljedeći omjer izračunat je za svaki uzorak: Omjer = O.D. uzorka / CO vrijednost Uzorci s optičkom gustoćom manjom od granične vrijednosti smatraju se negativnima (omjer < 1) prema Genscreen ULTRA HIV Ag Ab. Rezultate neposredno ispod granične vrijednosti (CO-10% < O.D. < CO) treba ipak interpretirati s oprezom. Preporučuje se ponovo testiranje u duplikatu odgovarajućih uzoraka kada to sustav i laboratorijski postupci dozvoljavaju. Uzorci s optičkom gustoćom većom ili jednakom graničnoj vrijednosti (omjer 1) smatraju se inicijalno pozitivnima prema Genscreen ULTRA HIV Ag-Ab. Prije konačne interpretacije trebaju se ponovo testirati u duplikatu. Ako je nakon ponovnog testiranja vrijednost omjera barem jednog od 2 duplikata ista ili veća od 1, inicijalni je rezultat ponovljiv i uzorak se može proglasiti pozitivnim prema Genscreen ULTRA HIV Ag-Ab. Ako je vrijednost omjera 2 duplikata manja od 1, inicijalni rezultat nije ponovljiv i uzorak se proglašava negativnim. Neponovljive reakcije često uzrokuju sljedeći čimbenici: Neodgovarajuće ispiranje mikrotitarske pločice, Kontaminacija negativnih uzoraka serumom ili plazmom s visokim titrom protutijela, Kontaminacija otopine supstrata oksidacijskim sredstvima (izbjeljivač, metalni ioni itd.), Kontaminacija otopine za zaustavljanje. Uzorke koji su ponovo testirani dva puta i proglašeni negativnim pomoću testa Genscreen ULTRA HIV Ab- Ag, ali s jednom vrijednosti blizu granične vrijednosti (omjer između 0,9 i 1), treba pažljivo razmotriti. Preporučuje se ponovo testirati bolesnika primjenom druge metode ili testirati drugi uzorak. U slučaju jako slabe optičke gustoće testiranih uzoraka (negativan O.D.) a kada je prisutnost uzoraka te reagensa kontrolirana, rezultati se mogu interpretirati kao negativni. Preporučuje se slijediti trenutne nacionalne preporuke i algoritme za potvrdu pozitivnih uzoraka. 7.7. Spektrofotometrijska verifikacija uzorka i pipetiranje konjugata (opcija) Verifikacija pipetiranja uzorka i konjugata 1 (R6) Moguće je potvrditi istovremenu prisutnost konjugata 1 (R6) i uzoraka u jažici automatskim očitanjem pri 620 nm. Svaka jažica koja sadrži uzorak i konjugat 1 (R6) mora imati O.D. veći od 0,600. Verifikacija pipetiranja radne otopine konjugata 2 Prisutnost konjugata 2 (R7a + R7b) u otvoru moguće je provjeriti automatskim očitanjem pri 450/620 nm. Vrijednost O.D. svake jažice mora biti veća od 0,100 (niža vrijednost OD ukazuje na lošu raspodjelu konjugata 2). Verifikacija pipetiranja razvojne otopine Moguće je potvrditi prisutnost ružičaste razvojne otopine u jažici automatskim očitanjem pri 490 nm. Jažica s razvojnom otopinom mora imati optičku gustoću veću od 0,100 (niža vrijednost OD ukazuje na lošu raspodjelu razvojne otopine). 8. OGRANIČENJA TESTA Vrlo nizak titar HIV antigena ili protutijela može ostati neotkriven tijekom prve faze infekcije, stoga negativni rezultat ukazuje na to da testirani uzorak ne sadrži HIV antigen ili anti-hiv protutijela koja je moguće otkriti testom Genscreen ULTRA HIV Ag-Ab. Međutim, takav rezultat ne isključuje mogućnost izloženosti infekciji virusom HIV-1/HIV-2. Raznolikost virusa HIV-1 (grupa M i grupa O) i HIV-2 pruža mogućnost lažno negativnih rezultata. Niti jedna poznata metoda testiranja ne može ponuditi potpunu sigurnost kad je riječ o nepostojanju HIV virusa. 10 [HR]
Visoko osjetljive ELISA tehnike mogu rezultirati lažnim pozitivnim rezultatima. Kako bi se provjerila specifičnost reakcije, svaki pozitivni rezultat (u skladu s kriterijima za interpretaciju testa Genscreen ULTRA HIV Ag-Ab) potrebno je potvrditi odgovarajućom metodom (specifičnim HIV Ag testom kao što je Genscreen HIV Ag EIA, zatim neutralizacijom kako bi se dokazala prisutnost HIV Ag-a ili testom Western- Blot kako bi se dokazala prisutnost anti-hiv protutijela). Zagrijavanje uzoraka može utjecati na kvalitetu rezultata. Spektrofotometrijska metoda za provjeru raspodjele uzoraka i otopine za razvoj konjugata, ne omogućuje provjeru točnosti raspodijeljenog volumena uzoraka i konjugata. Ovom se metodom dokazuje samo prisutnost uzorka i konjugata. Učestalost pogreške kod ove metode usko je povezana s točnošću korištenog sustava (kumulativni koeficijent varijacije iznad 10% za raspodjelu i očitavanje značajno smanjuje kvalitetu ovog koraka). Neki ikterični, hiperlipidemični ili hiperhemolizirani uzorci mogu utjecati na spektrofotometrijsku metodu provjere raspodjele konjugata 1. U ovom se slučaju može provjeriti samo prisutnost uzroka. U slučaju veoma niske učinkovitosti ispiranja nakon inkubacije konjugata, automatska provjera pipetiranja razvojne otopine (očitavanjem vrijednosti OD otvora pri 490 nm) može dati netočne rezultate s vrijednosti OD višom od 0,100 u odsutnosti razvojne otopine. Međutim, ta pojava nije primijećena tijekom evaluacije na 939 testiranih uzoraka. 9. KARAKTERISTIKE IZVEDBE 9.1. Mjerenje preciznosti Mjerenje preciznosti testa Genscreen ULTRA HIV Ag-Ab utvrđeno je analizom 10 uzoraka: 1 negativnog uzorka, 3 uzorka pozitivna na HIV-1 protutijela, 3 uzorka pozitivna na HIV-2 protutijela i 3 uzorka pozitivna na HIV-1 antigen. Ponovljivost unutar testa procijenjena je testiranjem tih 10 uzoraka 30 puta tijekom iste serije. Srednja preciznost procijenjena je dvostrukim testiranjem tih 10 uzoraka tijekom 20 dana u 2 nezavisna testiranja svaki dan. Izračunate su srednje vrijednosti omjera, standardne devijacije (SD) i koeficijenti varijacije (CV). HIV-1 Ab HIV-2 Ab HIV Ag 9.1.1. Ponovljivost Panel uzoraka N Srednja vrijednost omjera SD CV % Negativni 30 0,28 0,02 5,37 Nisko pozitivni 30 1,62 0,07 4,32 Srednje pozitivni 30 2,98 0,13 4,33 Visoko pozitivni 30 5,37 0,18 3,32 Nisko pozitivni 30 2,5 0,18 7,20 Srednje pozitivni 30 5,35 0,45 8,48 Visoko pozitivni 30 11,19 0,58 5,21 Nisko pozitivni 30 1,58 0,06 3,64 Srednje pozitivni 30 4,19 0,17 4,13 Visoko pozitivni 30 9,21 0,34 3,65 11 [HR]
HIV-1 Ab HIV-2 Ab HIV Ag 9.1.2. Srednja preciznost Panel uzoraka N Srednja vrijednost omjera Unutar serije Između serija Između dana/izvršitelja Ukupna preciznost SD CV SD CV SD CV SD CV Negativni 72 0,26 0,016 6,2% 0,014 5,5% 0,014 5,5% 0,025 9,9% Nisko pozitivni Srednje pozitivni Visoko pozitivni Nisko pozitivni Srednje pozitivni Visoko pozitivni Nisko pozitivni Srednje pozitivni Visoko pozitivni 72 1,04 0,029 2,8% 0,044 4,3% 0,056 5,4% 0,078 7,5% 72 2,67 0,076 2,8% 0,097 3,6% 0,170 6,4% 0,210 7,9% 72 4,91 0,114 2,3% 0,166 3,4% 0,328 6,7% 0,385 7,8% 72 1,73 0,114 6,6% 0,121 7,0% 0,263 15,2% 0,311 17,9% 72 4,40 0,477 10,8% 0,000 N/A 0,484 11,0% 0,680 15,4% 72 10,94 0,427 3,9% 0,319 2,9% 0,366 3,4% 0,647 5,9% 72 1,29 0,052 4,0% 0,038 3,0% 0,053 4,1% 0,084 6,5% 72 3,47 0,085 2,5% 0,134 3,9% 0,068 2,0% 0,173 5,0% 72 8,89 1,272 14,3% 0,000 N/A 0,000 N/A 1,272 14,3% 9.2. Učinkovitost dijagnosticiranja Učinkovitost testa Genscreen ULTRA HIV Ag-Ab utvrđena je testiranjem uzoraka slučajnih davatelja krvi, bolesnika s infekcijom virusom HIV i komercijalnih serokonverzijskih panela. Štoviše, granica osjetljivosti za HIV Ag testirana je korištenjem francuskog standarda ANSM i međunarodnog standarda SZO-a (90/636). Također su testirani bolesnici koji boluju od bolesti nepovezanih s infekcijom HIV-om. 9.2.1. Dijagnostička specifičnost Specifičnost utvrđena na ukupno 6038 slučajnih davatelja krvi s 3 različite lokacije dobivena je u 99,95% slučajeva s intervalom pouzdanosti od 95% [99,85 99,99%]. (6035 negativnih uzoraka/6038 testiranih uzoraka). Tri ponavljeno reaktivna uzorka potvrđena su negativnima na HIV putem Western Blot analize i testom HIV p24 Ag. 409 uzoraka iz 2 bolnička klinička laboratorija također je testirano testom Genscreen ULTRA HIV Ag-Ab; 14 uzoraka bilo je inicijalno reaktivno, a 12 od njih bilo je ponovljeno reaktivno (pozitivno u drugom testiranju): 11 je potvrđeno analizom HIV Western Blot, 1 nije potvrđen i smatrao se lažno pozitivnim. Specifičnost kod ove populacije bila je (397/398) 99,75%, Cl 95% [98,61 99,99%]. 9.2.2. Dijagnostička osjetljivost Osjetljivost je procijenjena testiranjem potvrđeno HIV Ab pozitivnih uzoraka, uzoraka bolesnika s akutnom infekcijom i komercijalnih serokonverzijskih panela te HIV Ag uzoraka (čistih ili razrijeđenih). 12 [HR]
1) Potvrđeni HIV Ab pozitivni uzorci Testirano je 763 pozitivnih uzoraka dobijenih tijekom praćenja bolesnika s HIV-1 i HIV-2 infekcijom. Ovim istraživanjem je dobivena osjetljivost od 100%. HIV-1 Vrste A, B, C (CDC klasifikacija) HIV-1 WB s potpunim profilima ili laganim anti-gag Ab pojasima HIV 1 grupa M (18A, 71B, 23C, 9D, 12E, 4F) Broj uzoraka Broj reaktivnih uzoraka Osjetljivost 200 200 100% 200 200 100% 137 137 100% Grupa O 22 22 100% Grupa N 1 1 100% BBI PRZ 204 panel 7 7 100% HIV-2 HIV-2 WB s potpunim profilima 196 196 100% Dodatnih 25 svježih pozitivnih uzoraka (unutar 1 dana nakon prikupljanja krvi) testirano je i svi su nađeni pozitivnima. 2) Uzorci bolesnika s akutnom infekcijom i iz komercijalnih serokonverzijskih panela 81 uzorak bolesnika akutno ili nedavno zaraženih virusom HIV-1 (35 uzoraka od 28 bolesnika s Western-Blot serokonverzijskim profilom i 46 uzoraka iz nedavne serokonverzije) ustanovljen je pozitivnim testom Genscreen ULTRA HIV Ag-Ab. 20 per-serokonverzijskih uzoraka (veoma rani serokonverzijski uzorci s negativnim Western-Blot profilom ili s veoma laganim pojasom za p24 i/ili gp160 na analizi HIV Western-blot): njih 19 nađeno je pozitivnima. Ukupno 90 dobro dokumentiranih komercijalnih HIV serokonverzijskih panela također je istraženo i uspoređeno s komercijalno dostupnim EIA testovima. Ti rezultati uspoređeni su na 85 panela s Ag-Ab testom s oznakom CE: Genscreen PLUS HIV Ag-Ab. Genscreen ULTRA HIV Ag-Ab Rezultati uspoređeni s testom Genscreen PLUS HIV Ag-Ab Ranija detekcija (najmanje jedan uzorak krvi) Ekvivalentna detekcija (isti uzorak prepoznat kao pozitivan) Kasnija detekcija Broj serokonverzija 44 41 0 Najmanje 170 ranih serokonverzijskih uzoraka testirano je testom Genscreen ULTRA HIV Ag-Ab. 9.3. Analitička osjetljivost HIV Ag standardi Analitička osjetljivost procijenjena je testiranjem 1. međunarodnog standarda SZO-a za HIV p24 antigen (90/636) i dobivena je vrijednost od 0,85 IU/ml Cl 95% [0,73 1,01 IU/ml]. Granica testa također je utvrđena na temelju standarda ANSM-a za HIV p24 antigen interpolacijom krivulje dobivene testiranjem razrjeđenja (početna koncentracija 100 pg/ml) i dobivena je vrijednost < 25 pg/ml. Tijekom vanjskih procjena ustanovljena je granica otkrivanja od 13,6 pg/ml regresijom standardnog raspona panela "Ag HIV SFTS 1998" (HIV Ag panel francuskog Društva za transfuziju krvi). Osjetljivost na HIV Ag pozitivnim uzorcima Testirano je 56 uzoraka: 53 uzorka koji sadrže najmanje 25 pg/ml HIV Ag-a bila su pozitivna, a 3 uzorka s 13, 16 i 19 pg/ml HIV Ag-a imala su omjere (optička gustoća/granična vrijednost) između 0,9 i 1,00. 13 [HR]
Osjetljivost na supernatantima stanica u kulturi Testirana su 83 supernatanta sljedećih genotipova: 76 uzoraka HIV-1 grupe M (16 A, 16 B, 11 C, 7D, 13 E, 4 F, 4 G, 3 H, 2 J), 4 uzorka HIV-1 grupe O, 1 HIV-1 grupe N i 2 HIV-2. Svi su uzorci HIV-1 bili reaktivni osim jednog uzorka grupe O s koncentracijom HIV Ag-a od 29 pg/ml čiji je omjer (optička gustoća/granična vrijednost) bio 0,60. 9.4. Analitičke specifičnosti/studija križne reaktivnosti 9.4.1 Studija križne reaktivnosti Testirana su 404 pacijenta s različitim patologijama ili stanjima nevezanima uz HIV (trudnice, reumatoidni čimbenici, autoimuna bolest (SLE), ciroza, kronično zatajenje bubrega, dijaliza, anti-mišji lg ili ostale virusne ili bakterijske infekcije (hepatitis A, B, C, rubeola, toksoplazmoza, zaušnjaci, ospice, CMV, HSV, EBV, VZV, HTLVI, malarija i bolesnici cijepljeni protiv gripe) testom Genscreen UTLRA HIV Ag-Ab. Utvrđeno je da su 4 uzorka bila lažno ponavljeno reaktivna (1 ospice IgG, 1 HSV IgG, 1 rubeola, 1 SLE). Specifičnost je bila 99,0% Cl 95% [97,5 99,7%] (400/404). 9.5. Prozonski učinak (hook effect) HIV Ag pozitivni uzorak: 19 razrjeđenja dobiveno je od nerazrijeđenog 1000 ng/ml do 3,125 pg/ml p24 HIV antigena u matrici negativnog seruma. Nisu primijećeni negativni rezultati na nerazrijeđenim uzorcima u usporedbi s razrijeđenim uzorcima. HIV Ab pozitivni uzorak: Pet (5) vrlo visoko anti HIV Ab pozitivnih uzoraka testirano je od čistog stanja do razrjeđenja 1/512e. Nisu primijećeni negativni rezultati na nerazrijeđenim uzorcima u usporedbi s razrijeđenim uzorcima. 10. BIBLIOGRAFSKE REFERENCE. 1. BARRE-SINOUSSI F., CHERMANN J.C., REY F. et al. Isolation of a T.lymphotropic retrovirus from a patient at risk for acquired immunodeficiency syndrome (AIDS), Science 1983, 220, 868-871. 2. BRUN-VEZINET F., ROUZIOUX C., BARRE-SINOUSSI F. et al. Detection of IgG antibodies to lymphadenopathy-associated in patients with Aids or lymphadenopathy syndrome. Lancet 1984, june, 1253-1256 3. CLAVEL F., GUYADER M., GUETARD D. et al. Molecular cloning and polymorphism of the human immune deficiency virus type 2. Nature 1986, 324, 691-695. 4. NORRBY E., BIBERFELD G., JOHNSON PR. et al. The chemistry of site-directed serology for HIV infections. AIDS Res Human Retroviruses 1989, 5, 487-493 5. MATHIESEN T., CHIODI F., BROLIDEN P.A., et al. Analysis of a subclass restricted HIV-1 gp 41 epitope by omission peptides. Immunology 1989, 67,1-7 6. PASQUALI J.L., KIENY M.P., KOLBE H. et al. Immunogenicity and epitope mapping of a recombinant soluble gp 160 of the human immunodeficiency virus type 1 envelope glycoprotein AIDS Res. Human Retroviruses 1990, 6, 1107-1113. 7. ZAAIJER H.L., EXEL-OEHLERS P.V., KRAAIJEVELD T. et al. Early detection of antibodies to HIV-1 by third-generation assays. The Lancet 1992, 340, 770-772. 8. COUROUCE AM. and the other members of the retrovirus study group of the french society of blood transfusion. Effectiveness of assays for antibodies to HIV and p24 antigen to detect very recent HIV infections in blood donors. AIDS 1992, 6, 1548-1550 14 [HR]
9. LANGE J.M.A., TEEUWSEN V.J.P., VAHLNE A., BARIN F. et al. Antigenic variation of the dominant gp41 epitope in Africa. AIDS 1993, 7, 461-466. 10. CONSTANTINE N.T. Serologic tests for retroviruses : approaching a decade of evolution. AIDS 1993, 7, 1-13. 11. VANDEN HAESEVELDE M., DECOURT JL., DE LEYS R. et al. Genomic cloning and complete sequence analysis of a highly divergent african human immunodeficiency virus isolate. J. Virology 1994, 68, 1586-1596. 12. GURTLER L.G., HAUSER P.H., EBERLE J. et al. A new subtype of human immunodeficiency virus type 1 (MVP-5180) from Cameroon. J. Virology 1994, 1581-1585 13. NAIR B.C., FORD G., KALYANARAMAN V.S. et al. Enzyme immunoassay using native envelope glycoprotein (gp 160) for detection of human immunodeficiency virus type 1 antibodies. J. Clin. Microbio 1994, 32, 1449-1456. 14. GAO F., YUE L., ROBERTSON D.L. et al. Genetic diversity of human immunodeficiency virus type 2 : evidence for distinct sequence subtypes with differences in virus biology. J.Virol. 1994, 68, 7433-7447. 15. BUSCH M.P., SATTEN G.A. Time course of viremia and antibody seroconversion following human immunodeficiency virus exposure. American J. Med. 1997, 102, 117-124. 16. AUBUCHON J.P., BIRKMEYER J.D., BUSCH M.P. Cost-effectiveness of expanded human immunodeficiency virus-testing protocols for donated blood. Transfusion 1997, 37, 45-51. 17. WEBER B. et al. Reduction of diagnostic window by new fourth-generation human immunodeficiency virus screening assays. J. Clin. Microbio. 1998, 36, 2235-2239. 18. GURTLER L., MUHLBACHER A., MICHL U. et al. Reduction of the diagnostic window with a new combined p24 antigen and human immunodeficiency virus antibody screening assay. J.Virology Methods 1998, 75, 27-38. 19. SIMON F., MAUCLERE P., ROQUES P. et al. Identification of a new human immunodeficiency virus type 1 distinct from group M and group O. Nature med. 1998, 4, 1032-1037. 20. COUROUCE AM. et le groupe de travail Retrovirus de la Societe Francaise de Transfusion Sanguine. Tests de depistage combine des anticorps anti-vih et de l antigene p24. Spectra Bio. 1999, 18, 38-44. 21. GISLEFOSS RE, GRIMSRUD TK, MOKRID L. Stability of selected serum proteins after long-term storage in the Janus Serum Bank. 15 [HR]
16 [HR]
17 [HR]
18 [HR]
19 [HR]
Bio-Rad 3, Boulevard Raymond Poincare 92430 Marnes-la-Coquette - France Tel: +33 (0) 1 47 95 60 00 2013/10 Fax: +33 (0) 1 47 41 91 33 883637 www.bio-rad.com 20 [HR]