MAX CT/GC/TV Za in vitro dijagnostiku P0185(06) Za korištenje sa sustavom BD MAX Hrvatski 2797 NAMJENA Test BD MAX CT/GC/TV, u obliku u

Транскрипт

1 MAX CT/GC/TV Za in vitro dijagnostiku P0185(06) Za korištenje sa sustavom BD MAX Hrvatski 2797 NAMJENA Test BD MAX CT/GC/TV, u obliku u kojem je implementiran u sustavu BD MAX, obuhvaća automatiziranu ekstrakciju DNK i polimeriziranu lančanu reakciju (PCR) u stvarnom vremenu za izravno kvalitativno otkrivanje DNK iz bakterije Chlamydia trachomatis (CT), Neisseria gonorrhoeae (GC) i/ili Trichomonas vaginalis (TV). Test se može koristiti za otkrivanje DNK bakterije CT i/ili GC u uzorcima muškog urina te otkrivanje DNK bakterije CT i/ili GC i/ili TV u uzorcima ženskog urina, klinički prikupljenim ženskim endocervikalnim uzorcima brisa i vaginalnim uzorcima brisa prikupljenim od pacijentica (u kliničkom okruženju). Test je indiciran kao pomoć pri dijagnozi klamidijske urogenitalne bolesti, gonokokne urogenitalne bolesti i/ili trihomonijaze u asimptomatskih i simptomatskih osoba. SAŽETAK I OBJAŠNJENJE POSTUPKA Svjetska zdravstvena organizacija procjenjuje da se godišnje dijagnosticira 130,9 milijuna novih slučajeva zaraze bakterijom Chlamydia trachomatis. 1 Genitalna infekcija bakterijom Chlamydia trachomatis može prouzročiti dugoročnu sekvelu kod žena, kao npr. upalnu bolest zdjelice, ektopičnu trudnoću, neplodnost i rođenje djece nedovoljne težine. Asimptomatska zaraza klamidijom česta je i kod muškaraca i kod žena, a otkrivanje bolesti često ovisi o pregledavanju populacije koja se najviše smatra izloženom riziku od zaraze. Pedeset posto muškaraca zaraženih bakterijom Chlamydia trachomatis također je asimptomatsko, a u izostanku liječenja zaraza može prerasti u akutni uretritis ili epididimitis i kronični proktitis. Chlamydia trachomatis prenosi se spolnim kontaktom, ali također i unutar porođajnog kanala, što dovodi do neonatalnog konjuktivitisa i/ili klamidijske upale pluća. 2 Chlamydia trachomatis je gram-negativna, obligatna unutarstanična bakterija koja formira karakteristične unutarstanične inkluzije primjetne u staničnoj kulturi pomoću fluorescentne mikroskopije nakon primjene bojenja specifičnog za antigene. 3 Postojeće metode dijagnoze zaraze bakterijom Chlamydia trachomatis uključuju imunološku i analizu kultura, kao i otkrivanje nukleinskih kiselina izravnom hibridizacijom ili pojačavanjem. Iako je povijesno kultura bila zlatni standard za otkrivanje bakterije Chlamydia trachomatis, unaprijeđena osjetljivost metoda pojačanja dovela je do njihovog povećanog prihvaćanja i pridonijela povećanju zabilježenih slučajeva zaraze. Svjetska zdravstvena organizacija procjenjuje da se svake godine dijagnosticira 78,3 milijuna novih izlječivih slučajeva zaraze zbog bakterije Neisseria gonorrhoeae. 1 Zaraza žena često je asimptomatska, a ako se ne liječi, može dovesti do upalne bolesti zdjelice, neplodnosti, ektopične trudnoće i kronične boli u zdjelici. Kod muškaraca, simptomi akutnog uretritisa i dizurije obično dovode do toga da se zaraženi podvrgnu liječenju prije negoli nastupi ozbiljna sekvela. Neisseria gonorrhoeae prenosi se spolnim putem, ali također i unutar porođajnog kanala, što dovodi do neonatalnog konjuktivitisa. Neisseria gonorrhoeae je gram-negativna, oksidazno pozitivna grupa po dvije bakterije, primjetna u gram razmazima uretalnih ostataka, obično unutar neutrofila. Kultura Neisseria gonorrhoeae može biti teška jer organizam ne preživljava dugo izvan domaćina i vrlo je osjetljiv na nepogodne uvjete u okruženju, kao što su nedostatak vlage i ekstremne temperature. Vaginalne infekcije koje uzrokuje Trichomonas vaginalis među najčešćim su spolno prenosivim bolestima. Procjenjuje se da se u svijetu godišnje pojavljuje 142,6 milijuna novih slučajeva trihomonijaze. 1 Usprkos tome što je spolno prenosiva bolest koja se brzo dijagnosticira i liječi, trihomonijaza se ne prijavljuje, a kontrola te zaraze dobiva relativno malo pozornosti javnih zdravstvenih programa za kontrolu spolno prenosivih bolesti. 4 Trihomonijazu uzrokuje parazitska protozoalna Trichomonas vaginalis. Infekcija u nekih žena izaziva simptome koje karakterizira mutan žuto-zeleni vaginalni iscjedak neugodnog mirisa praćen iritacijom stidnice. Infekcija može uzrokovati nelagodu tijekom spolnog odnosa i mokrenja, kao i iritaciju i svrbež ženskog genitalnog područja. Genitalna upala izazvana trihomonijazom može povećati osjetljivost žene na zarazu virusom HIV-a u slučaju izloženosti. Oboljenje od trihomonijaze može povećati izglede da žena zaražena HIV-om prenese taj virus svojim partnerima. 5 Zaražene žene mogu imati minimalne ili nikakve simptome bolesti. Stoga se ispitivanje prisutnosti Trichomonas vaginalis u žena može uzeti u obzir za one koje su izložene velikom riziku od zaraze (tj. žene koje imaju novog partnera ili više njih, koje imaju povijest spolno prenosivih bolesti, koje naplaćuju seksualne usluge i uzimaju lijekove putem šprice). 4 1

2 Za pacijente koji imaju simptome vaginitisa danas se obično koristi ispitivanje mokrog preparata. Pomoću tog ispitivanja sa stakalcem liječnik ima na raspolaganju nekoliko rezultata za određivanje simptoma vaginitisa. Na rezultat mokrog preparata mogu utjecati čimbenici kao što je iskustvo osobe koja rukuje mikroskopom, vrijeme proteklo od pripreme do tumačenja, temperatura okoline i uređaji korišteni za prikupljanje. Rezultat mokrog preparata može se tumačiti kao pozitivan samo ako osoba koja rukuje mikroskopom može vizualizirati pokretljive trihomone. Drugi često korišten test je kultura za Trichomonas vaginalis. Na učinkovitost kulture može utjecati vrijeme između inokulacije i inkubacije, kao i temperatura na kojoj se kultura čuva prije i za vrijeme inkubacije. Trihomoni su iznimno osjetljivi na niske temperature, a hlađenje može na kulturu imati negativan učinak. Osjetljivost mokrog preparata i TV kulture može u optimalnim uvjetima biti od % 6 u usporedbi s PCR-om. NAČELA POSTUPKA Uzorak se prikuplja od pacijenta pomoću BD MAX UVE Specimen Collection Kit (kompleta za prikupljanje uzoraka BD MAX UVE) te se prenosi do laboratorija pod utvrđenim vremenskim i temperaturnim uvjetima kako bi se očuvala cjelovitost ciljnih nukleinskih kiselina. Uzorak se nakratko izmiješa orbitalnom miješalicom i onda zagrijava na BD Pre-warm Heater (BD grijaču za predzagrijavanje) kako bi se razgradila sluz, homogenizirao uzorak matrice i lizirali ciljni organizmi. Nakon automatskog hlađenja BD MAX UVE Sample Buffer Tubes (epruvete s puferom za uzorak BD MAX UVE) ponovno se zatvaraju opnastim čepićem. Stvara se radna lista, a epruveta s puferom za uzorak BD MAX UVE, unificirana reagens traka BD MAX CT/GC/TV i patrona BD MAX PCR umeću se u sustav BD MAX. Sustav BD MAX automatski priprema uzorke, uključujući liziranje ciljnog organizma, izdvajanje i koncentraciju DNK, rehidrataciju reagensa te pojačavanje i otkrivanje ciljnih nukleinskih kiselina pomoću PCR -a u stvarnom vremenu. Sustav BD MAX automatski tumači rezultate. Test također uključuje kontrolu obrade uzoraka koji se nalazi u epruveti za izdvajanje. Kontrola obrade uzoraka prati korake izdvajanja DNK, korake toplinskog kruženja, cjelovitost reagensa i prisutnost inhibitornih tvari. Nakon lizije stanica otpuštene nukleinske kiseline zadržavaju se na magnetnim prianjajućim kuglicama. Kuglice, koje vežu nukleinske kiseline, peru se pomoću pufera za pranje, a nukleinske kiseline toplinom se ispiru u puferu za eluaciju. Isprana DNK neutralizira se pomoću pufera za neutralizaciju i prenosi u glavnu mješavinu kako bi rehidratizirala PCR reagense. Nakon rekonstitucije sustav BD MAX u patronu BD MAX PCR ulijeva fiksnu količinu otopine spremne za PCR koja sadrži izdvojene nukleinske kiseline. Sustav zapečaćuje mikroventile u patroni BD MAX PCR prije pokretanja PCR procesa koji uključuje mješavinu za amplifikaciju i tako sprječava isparavanje i kontaminaciju. Pojačana DNK otkriva se pomoću sondi (TaqMan) za hidrolizu, označenim na jednom kraju fluorescentnom bojom (fluorofor), a na drugom kraju prigušivačem. Sonde označene različitim fluoroforima koriste se za otkrivanje amplikona za ciljne analite i kontrolu obrade uzoraka u tri različita optička kanala sustava BD MAX. Kada su sonde u svom prirodnom stanju, fluorescencija fluorofora je prigušena zbog njegove blizine prigušivaču. No, u prisutnosti ciljne DNK, sonde hibridiziraju u dodatnim sljedovima i hidroliziraju se pomoću aktivnosti 5' 3' egzonukleaze polimeraze DNK dok se ona sintetizira s nascentnom trakom uzduž DNK predloška. Kao rezultat, fluorofori se odvajaju od molekula prigušivača i emitira se fluorescencija. Sustav BD MAX prati ove signale u svakom ciklusu i tumači podatke na kraju reakcije kako bi pružio kvalitativne rezultate ispitivanja za svaki analit (tj. pozitivno ili negativno). REAGENSI I MATERIJALI Kat. br. Sadržaj Količina BD MAX CT/GC/TV Master Mix (Glavna mješavina BD MAX CT/GC/TV) (B1) 24 testa Glavna mješavina PCR sušena u pećnici sadrži DNK polimerazu, nukleotide i specifične CT/GC/TV (2 x 12 epruveta) molekularne početnike i sonde, zajedno s početnicima i sondama specifičnim za kontrolu obrade uzoraka. BD MAX CT/GC/TV Unificirane reagens trake koje sadrže sve tekuće reagense i vrške pipeta za jednokratnu upotrebu 24 testa potrebne za obradu uzoraka i izdvajanje DNK. BD MAX CT/GC/TV Extraction Tubes (Epruvete za ekstrakciju BD MAX CT/GC/TV) (B2) Kapsula sušena u pećnici koja sadrži DNK magnetske prianjajuće kuglice, proteazne reagense i kontrolu obrade uzoraka 24 testa (2 x 12 epruveta) Opnasti čepići 25 POTREB MATERIJALI KOJI SE NABAVLJAJU ZASEBNO Sustav BD MAX (BD, kat. br ) BD Pre-warm Heater Kit (grijač za predzagrijavanje) (BD Heater i BD MAX Rack) (BD, kat. br ) BD MAX PCR Cartridges (patrone) (BD, kat. br ) BD MAX UVE Specimen Collection Kit (komplet za prikupljanje uzoraka) (BD, kat. br ) BD MAX UVE Sample Buffer Tubes (epruvete s puferom za uzorak) (BD, kat. br ) BD ProbeTec ET Caps (čepovi) (BD, kat. br ) Vortex Genie 2 (VWR*, kat. br ) ili istovjetan Rukavice za jednokratnu uporabu, bez pudera UPOZORENJA I MJERE OPREZA Test BD MAX CT/GC/TV služi za in vitro dijagnostiku. Ako se uzorci endocervikalnih ili vaginalnih briseva koje su pacijentice samostalno uzele odmah ne prenesu u epruvetu s puferom za uzorak BD MAX UVE, moraju se prenijeti u roku od 2 sata od uzimanja uzorka ako se drže na temperaturi 2 30 C. Uzorci prvog jutarnjeg urina držani na temperaturi 2 30 C moraju se prenijeti iz posude za uzimanje uzorka u epruvetu s puferom za uzorak BD MAX UVE u roku od 4 sata od uzimanja uzorka ili u roku od 24 sata kad se čuvaju na temperaturi od 2 8 C. Ne koristite reagense i/ili materijale nakon isteka roka trajanja. 2

3 Komplet nemojte upotrebljavati ako je sigurnosni pečat na vanjskoj kutiji slomljen prilikom dostave. Ne koristite reagense ako je njihova zaštitna vrećica otvorena ili oštećena prilikom dostave. Ne koristite reagense ako u vrećicama reagensa nema upijača vlage ili ako je slomljen. Ne uklanjajte upijač vlage iz vrećica reagensa. Brzo zatvorite zaštitne vrećice patentnim zatvaračem nakon svake uporabe. Uklonite sav višak zraka u vrećicama prije zatvaranja. Zaštitite reagense od topline i vlage. Duža izloženost vlazi može utjecati na rad proizvoda. Ne koristite reagense ako je folija potrgana ili oštećena. Nemojte miješati reagense iz različitih vrećica i/ili kompleta i/ili serija. Ne zamjenjujte ni ne koristite ponovno kapice poklopaca jer može doći do kontaminacije koja može kompromitirati rezultate. Provjerite da su unificirane reagens trake u dodiru s odgovarajućim tekućinama (provjerite jesu li tekućine na dnu epruveta) (pogledajte sliku 2). Provjerite unificirane reagens trake da biste se uvjerili da sadrže vrške pipeta (pogledajte sliku 2). Pri korištenju kemijskih otopina postupajte oprezno jer se čitljivost crtičnih kodova glavne mješavine i epruvete za izdvajanje može smanjiti. Dobra laboratorijska tehnika ključna je za odgovarajuću provedbu ovog testa. Zbog visoke analitičke osjetljivosti ovog testa potrebno je biti krajnje pažljiv kako bi se očuvala čistoća svih materijala i reagensa. U slučajevima gdje se drugi PCR testovi obavljaju u istom općem području laboratorija, potreban je oprez kako se ne bi kontaminirao test BD MAX CT/GC/TV, ostali reagensi potrebni za testiranje, kao ni sustav BD MAX. Uvijek izbjegavajte kontaminaciju reagensa mikrobima i deoksiribonukleazom (DNaza). Rukavice se moraju promijeniti prije rukovanja reagensima i patronama. Kako bi se izbjeglo zagađenje okoliša amplikonima, ne razdvajajte patrone BD MAX PCR nakon korištenja. Sigurnosni pečati na patronama BD MAX PCR osmišljeni su za sprječavanje zagađenja. Laboratorij mora obavljati rutinsko praćenje okoliša kako bi se smanjio rizik križne kontaminacije. Obavljanje testa BD MAX CT/GC/TV izvan preporučenih vremenskih i temperaturnih okvira preporučenih za prijevoz i pohranu uzoraka može dati pogrešne rezultate. Testove koji nisu obavljeni unutar određenog vremena potrebno je ponoviti koristeći novi uzorak. Mogu se testirati dodatne kontrole u skladu sa smjernicama ili zahtjevima lokalnih, državnih, regionalnih i/ili saveznih propisa ili organizacija koje donose propise. Uvijek rukujte uzorcima kao da su infektivni i u skladu sa sigurnosnim postupcima u laboratoriju, kao što su oni opisani u dokumentu CLSI M29 7 i dokumentu Biološka sigurnost u mikrobiološkim i biomedicinskim laboratorijima. 8 Za vrijeme rukovanja bilo kojim reagensom nosite zaštitnu odjeću i rukavice za jednokratnu upotrebu. Nakon obavljenog testa temeljito operite ruke. Ne pipetirajte ustima. Ne pušite, ne pijte, ne žvačite i ne jedite u prostorima gdje se rukuje uzorcima ili reagensima kompleta. Odložite nekorištene reagense i otpad u skladu s lokalnim, državnim, regionalnim i/ili saveznim propisima. U korisničkom priručniku sustava BD MAX 9 i priručniku BD grijača za predzagrijavanje 10 potražite dodatna upozorenja, mjere opreza i postupke. POHRANA I STABILNOST Stabilnost uzorka Uzorke prvog jutarnjeg urina moraju se prenijeti iz posude za uzimanje uzorka u epruvetu s puferom za uzorak BD MAX UVE u roku od 4 sata nakon uzimanja kad se čuvaju na temperaturi 2 30 C ili 24 sata nakon uzimanja kad se čuvaju na temperaturi 2 8 C. Uzorci endocervikalnih briseva koje uzima liječnik i vaginalnih briseva koje uzimaju pacijentice moraju se (po mogućnosti) odmah ili u roku od dva sata prenijeti u epruvetu s puferom za uzorak BD MAX UVE kada se čuvaju na temperaturi 2 30 C. Zaštitite ih od izlaganja prevelikoj toplini. Tablica 1: Stabilnost uzorka prije prijenosa u epruvetu s puferom za uzorak BD MAX UVE Stabilnost uzorka Prije prijenosa u epruvetu s puferom za uzorak BD MAX UVE Vrsta uzorka Temperatura tijekom transporta i/ili pohrane 2 30 C 2 8 C Urin 4 sata 24 sata Vaginalni/endocervikalni bris 2 sata 2 sata Uzorak urina ili brisa u epruvetama s puferom za uzorak BD MAX UVE može se prenositi i čuvati do 5 dana na temperaturi 2 30 C ili 30 dana na -20 C prije predzagrijavanja. Tablica 2: Stabilnost uzorka u epruveti s puferom za uzorak BD MAX UVE prije predzagrijavanja Stabilnost uzorka U epruveti s puferom za uzorak BD MAX UVE (prije predzagrijavanja) Temperatura tijekom transporta i/ili pohrane Vrsta uzorka 2 30 C -20 C Urin i vaginalni/endocervikalni bris 5 dana 30 dana 3

4 Nakon što se predzagriju, uzorci prethodno pohranjeni na 2 30 C (pogledajte tablicu 2) mogu se pohraniti dodatnih 5 dana na 2 30 C (pogledajte tablicu 3) ili dodatnih 30 dana na -20 C (pogledajte tablicu 3) prije ispitivanja u sustavu BD MAX. Nakon što se predzagriju, uzorci prethodno pohranjeni na -20 C (pogledajte tablicu 2) mogu se pohraniti dodatnih 5 dana na -20 C (pogledajte tablicu 3) ili na 2 30 C (pogledajte tablicu 3) prije ispitivanja u sustavu BD MAX. NAPOMENA: kombinirana stabilnost uzoraka [prije predzagrijavanja (tablica 2) i nakon predzagrijavanja (tablica 3)] ne može premašiti ukupno 35 dana. Tablica 3: Stabilnost uzorka u epruveti s puferom za uzorak BD MAX UVE nakon predzagrijavanja Stabilnost uzorka Nakon predzagrijavanja (prethodno pohranjeno na 2 30 C) Nakon predzagrijavanja (prethodno pohranjeno na -20 C) Vrsta uzorka Temperatura pohrane 2 30 C -20 C Urin i vaginalni/endocervikalni bris 5 dana 30 dana Urin i vaginalni/endocervikalni bris 5 dana 5 dana Stabilnost reagensa Komponente sustava BD MAX CT/GC/TV stabilne su na 2 25 C do navedenog roka upotrebe. Ne koristite komponente nakon isteka roka trajanja. Glavna mješavina i epruvete za izdvajanje BD MAX CT/GC/TV dolaze u zapečaćenim vrećicama. Za zaštitu proizvoda od vlage, odmah zatvoriti nakon otvaranja. Epruvete reagensa stabilne su do 7 dana na 2 25 C nakon prvog otvaranja i zatvaranja vrećice. Tablica 4: Stabilnost reagensa Sastavnice kompleta Temperatura Stabilnost Glavna mješavina Zapečaćena vrećica (neotvorena) 2 25 C do otisnutog roka trajanja Otvorena vrećica (ponovno zatvorena) 2 25 C 7 dana a Epruveta za izdvajanje Zapečaćena vrećica (neotvorena) 2 25 C do otisnutog roka trajanja Otvorena vrećica (ponovno zatvorena) 2 25 C 7 dana a Unificirane reagens trake 2 25 C do otisnutog roka trajanja a Kad originalni pečat na vrećici bude slomljen, nakon svake upotrebe pažljivo zatvorite vrećicu koja sadrži upijač vlage patentnim zatvaračem i pohranite je na odgovarajućoj temperaturi. UPUTE ZA UPOTREBU Priprema/prijevoz uzoraka Uzorci se trebaju prikupljati isključivo kompletom za uzimanje uzoraka BD MAX UVE prema uputama s pakiranja kompleta za uzimanje uzoraka BD MAX UVE. Nosite čiste rukavice kada rukujete dijelovima i uzorcima iz kompleta za uzimanje uzoraka BD MAX UVE. Ako rukavice dođu u dodir s uzorkom, odmah ih promijenite da izbjegnete kontaminaciju drugih uzoraka. Za uzorke koji još nisu preneseni u epruvetu s puferom za uzorak BD MAX UVE uzorke za testiranje pripremite slijedeći upute u nastavku. Prijenos uzorka urina u epruvetu s puferom za uzorak BD MAX UVE: NAPOMENA: urin se mora prenijeti iz posude za uzimanje uzorka u epruvetu s puferom za uzorak BD MAX UVE u roku od 4 sata nakon uzimanja kad se čuva na 2 30 C ili u roku od 24 sata nakon uzimanja kad se čuva na 2 8 C. 1. Odčepite epruvetu s puferom za uzorak BD MAX UVE. Koristite pipetu za prijenos s mjerilom za nježno miješanje uzorka u posudi za uzimanje uzorka i prenesite oko 1 ml u epruvetu s puferom za uzorak BD MAX UVE. NAPOMENA: koristite mjerilo na pipeti za prijenos kao vodič. Nemojte previše ili premalo napuniti epruvetu. 2. Odložite pipetu za prijenos u spremnik za biološki otpad. NAPOMENA: pipeta za prijenos namijenjena je korištenju s jednim uzorkom. 3. Čvrsto zategnite čep epruvete s puferom za uzorak BD MAX UVE. 4. Okrenite epruvetu s puferom za uzorak BD MAX UVE 3 4 puta da budete sigurni da su se uzorak i reagens dobro pomiješali. 5. Označite epruvetu s puferom za uzorak BD MAX UVE identifikacijskim podacima pacijenta i datumom/vremenom uzimanja uzorka. NAPOMENA: pazite da ne zaklonite crtične kodove na epruveti. 6. Nastavite s postupkom u grijaču za predzagrijavanje BD. Prijenos uzoraka endocervikalnog ili vaginalnog brisa u epruvetu s puferom za uzorak BD MAX UVE: NAPOMENA: briseve je poželjno odmah prenijeti iz omota štapića u epruvetu s puferom za uzorak BD MAX UVE ili u roku od 2 sata nakon uzimanja uzorka kada se čuvaju na 2 30 C. NAPOMENA: pogledajte sliku 1 da biste vidjeli sažetak tijeka prijenosa uzorka brisa. 1. Odčepite epruvetu s puferom za uzorak BD MAX UVE i umetnite cijeli štapić u epruvetu tako da vrh bude na dnu. 2. Držeći štapić za čep pažljivo odlomite dršku štapića na zarezanoj oznaci. Budite oprezni da izbjegnete prolijevanje ili kontaminaciju sadržaja epruvete. 4

5 3. Čvrsto zategnite čep epruvete s puferom za uzorak BD MAX UVE. 4. Označite epruvetu s puferom za uzorak BD MAX UVE podacima pacijenta i datumom/vremenom uzimanja uzorka. NAPOMENA: pazite da ne zaklonite crtične kodove na epruveti. 5. Nastavite s postupkom u grijaču za predzagrijavanje BD. Slika 1: prijenos uzorka brisa u epruvetu s puferom za uzorak BD MAX UVE 1. Umetnite cijeli štapić u epruvetu tako da vrh bude na dnu. 2. Pažljivo odlomite dršku na zarezanoj oznaci. 3. Čvrsto začepite epruvetu. 4. Označite epruvetu podacima pacijentice. Rad s grijačem za predzagrijavanje BD (Upute za rad potražite u Priručniku grijača za predzagrijavanje BD 10 ) 1. Odaberite opciju <BD MAX CT GC TV 58> sa zaslona Pokretanje radne liste (Run > Worklist) (Pokreni > Radna lista). 2. Unesite crtični kod sa svake od epruveta s puferom za uzorak BD MAX UVE u polje Sample Tube (Epruveta s uzorkom) s pomoću skenera crtičnog koda zajedno s ID-jem pristupa pacijenta. 3. Unesite serijski broj kompleta putem zaslona Run > Kit Inventory (Pokreni > Sadržaj kompleta) sustava BD MAX CT/GC/TV (radi praćenja serije) skenirajući crtični kod skenerom. NAPOMENA: provjerite je li u postavkama Configuration > System (Konfiguracija > Sustav) omogućeno praćenje broja serije. 4. Radni popis na čekanju bit će ažuriran i prikazivat će potvrdni okvir za zakazivanje koraka predzagrijavanja. 5. Zakažite uzorak stavljanjem kvačice u okvir na radnom popisu na čekanju. 6. Pomoću prozorčića na naljepnici na epruveti s puferom za uzorak BD MAX UVE provjerite je li uzorak urina ili brisa dodan u epruvetu. 7. Kratko izmiješajte uzorak orbitalnom miješalicom prije nego što ga stavite u grijač za predzagrijavanje BD. 8. Stavite epruvetu s puferom za uzorak BD MAX UVE (s uzorkom) u grijač za predzagrijavanje BD. U stanicu može stati do 24 epruvete s puferom za uzorak. 9. Zatvorite poklopac na grijaču za predzagrijavanje BD i odaberite Pre-warm (Predzagrij) na ploči Run > Worklist (Pokreni > Radna lista). NAPOMENA: provjerite nalaze li se epruvete fizički na stalku za predzagrijavanje BD i je li stalak umetnut u BD grijač za predzagrijavanje, a zatim odaberite OK (U redu) pored poruke Pokreni predzagrijavanje. Pokreće se određeni profil zagrijavanja i hlađenja uređaja BD MAX CT/GC/TV. 5

6 10. Na zaslonu statusa prikazat će se vrijeme završetka pregrijavanja. 11. Na Radnom popisu na čekanju odabrani uzorak/test prikazivat će se s porukom Pre-warm Complete (Predzagrijavanje završeno). 12. Nakon što uspješno završite korak predzagrijavanja, izvadite epruvetu s puferom za uzorak BD MAX UVE iz grijača za predzagrijavanje BD i pripremite sljedeće: NAPOMENA: nosite čiste rukavice kada rukujete epruvetom s puferom za uzorak BD MAX UVE. Uzorci brisa: NAPOMENA: ako bris nije zaštićen čepićem, pažljivo izvadite štapić na sterilan način prije nego što ga ponovno začepite probušivim plavim opnastim čepićem. a. Odčepite epruvetu s puferom za uzorak BD MAX UVE i nježno pritisnite štapić o stijenku epruvete tako da uklonite višak tekućine. b. Izvucite štapić/čep iz epruvete s puferom za uzorak BD MAX UVE i bacite ga. c. Ponovo začepite epruvetu probušivim plavim opnastim čepićem. Uzorci urina: a. Skinite tvrdi čep s epruvete s puferom za uzorak BD MAX UVE i bacite ga. b. Ponovo začepite epruvetu probušivim plavim opnastim čepićem. 13. Nastavite rad na sustavu BD MAX da biste postavili BD MAX System Rack (stalak sustava BD MAX). NAPOMENA: u slučaju neuspješnog predzagrijavanja, tajmer sustava BD MAX prikazat će poruku Failed / Cooling (Neuspješno/Hlađenje). Za testiranje u sustavu BD MAX neophodno je ponoviti postupak predzagrijavanja. NAPOMENA: test BD MAX CT/GC/TV može se napraviti tek nakon uspješnog završetka prethodno opisanog koraka predzagrijavanja. Uzorci koji su uspješno prošli ciklus predzagrijavanja ne moraju se ponovo zagrijavati u slučaju ponovnog testiranja. NAPOMENA: u laboratorijima s više sustava BD MAX i grijača za predzagrijavanje BD uzorci se moraju testirati i/ili ponovo testirati na istom sustavu BD MAX na kojem je obavljeno predzagrijavanje. NAPOMENA: pogledajte tablicu 3 u vezi sa stabilnošću uzorka nakon što uspješno završite korak predzagrijavanja, a prije testiranja u sustavu BD MAX. Pohranjene uzorke dovedite na sobnu temperaturu i promiješajte kratko orbitalnom miješalicom prije testiranja u sustavu BD MAX. Ako se uzorci testiraju neposredno nakon postupka predzagrijavanja, prije testiranja u sustavu BD MAX nije potrebno miješanje u orbitalnoj miješalici. Rad sustava BD MAX NAPOMENA: detaljne upute potražite u Korisničkom priručniku sustava BD MAX 9 (odjeljak Rad sustava). NAPOMENA: za svaki je uzorak potrebna jedna (1) glavna mješavina (B1), jedna (1) epruveta za izdvajanje (B2) i jedna (1) unificirana reagens traka. Ako se testiraju External Controls (Vanjske kontrole), za svaku je kontrolu potrebna jedna (1) epruveta s puferom za uzorak BD MAX UVE i jedan (1) opnasti čepić (npr. jedan za vanjsku kontrolu s pozitivnim rezultatom i jedan za kontrolu s negativnim rezultatom). Pripremite potrebnu količinu materijala BD MAX i izvadite ih iz zaštitnih vrećica ili kutija. Da biste odložili otvorene vrećice glavne mješavine ili epruveta za izdvajanje, uklonite višak zraka i zatvorite ih zatvaračem, pripazivši da se u vrećici nalazi vrećica za isušivanje. 1. Uključite sustav BD MAX (ako već niste) i prijavite se tako da unesete <user name> (korisničko ime) i <password> (lozinku). 2. Rukavice se moraju promijeniti prije rukovanja reagensima i patronama. 3. Izvadite potreban broj unificiranih reagens traka iz kompleta BD MAX CT/GC/TV. Nježno tapkajte unificiranom reagens trakom od tvrdu površinu da biste sve tekućine doveli na dno epruveta. 4. Izvadite potreban broj epruveta za izdvajanje i epruveta s glavnom mješavinom iz zaštitnih vrećica. Uklonite sav višak zraka iz vrećica i zatvorite ih zatvaračem. 5. Za testiranje svakog uzorka postavite jednu (1) unificiranu reagens traku na stalak sustava BD MAX počevši od položaja 1 na stalku A. 6. Utisnite jednu (1) epruvetu za izdvajanje (bijela folija) u unificirane reagens trake u položaju 1 kako je prikazano na slici Utisnite jednu (1) epruvetu glavne mješavine (zelena folija) u unificirane reagens trake u položaju 2 kako je prikazano na slici 2. Slika 2: utiskivanje epruvete za glavnu mješavinu i epruvete za izdvajanje BD MAX CT/GC/TV u unificirane trake reagensa 6

7 8. Postavite epruvete s puferom za uzorak BD MAX UVE na stalke sustava BD MAX u skladu s unificiranim trakama reagensa složenim u koracima 5 do Stavite potreban broj patrona BD MAX PCR u sustav BD MAX (pogledajte sliku 3). U svaku od patrona može stati do 24 uzorka. Sustav BD MAX automatski će odabrati položaj i red na patroni BD MAX PCR za svaki krug testiranja. Patrone BD MAX PCR mogu se koristiti više puta, dok se svi utori ne iskoriste. Da biste maksimalno iskoristili patrone BD MAX PCR, u načinu rada za 2000 uzoraka odaberite Run Wizard (Pokreni čarobnjak) na kartici Radna lista za dodjelu redaka. Više informacija potražite u Korisničkom priručniku za sustav BD MAX. 9 Slika 3: umetanje PCR patrona 10. Umetanje stalaka u sustav BD MAX (pogledajte sliku 4). strana A strana B Slika 4: umetanje stalaka u sustav BD MAX 11. Zatvorite poklopac sustava BD MAX i kliknite <Start> (Pokreni) da biste pokrenuli obradu. 12. Na kraju postupka odmah provjerite rezultate ili spremite epruvetu s puferom za uzorak BD MAX UVE u skladu s temperaturama i vremenima navedenima u tablici 3 dok se rezultati ne provjere. NAPOMENA: ako je tijekom testiranja oštećen opnasti čepić i potrebno je ponoviti postupak, zamijenite ga novim prije ponavljanja testiranja. NAPOMENA: prije pohranjivanja opnasti čep zamijenite tvrdim čepom. NAPOMENA: za stabilnost uzoraka iz pripremljenih epruveta s puferom za uzorak BD MAX UVE nakon predzagrijavanja pogledajte tablicu 3. Kada se dobije Indeterminate (IND) (Neodređeni), Unresolved (UNR) (Nerazriješeni) ili Incomplete (INC) (Nepotpuni) rezultat, ili kada dođe do pogreške vanjskih kontrola, u tom vremenskom roku treba ponoviti testiranje s istom epruvetom s puferom za uzorak BD MAX UVE (pogledajte odjeljak Ponavljanje postupka testiranja). KONTROLA KVALITETE Postupci kontrole kvalitete osmišljeni su za nadzor izvedbe testa. Laboratoriji su dužni odrediti broj, vrstu i učestalost testiranja kontrolnih materijala u skladu sa smjernicama ili zahtjevima lokalnih, regionalnih, državnih i federalnih propisa ili akreditacijske ustanove kako bi se nadgledala učinkovitost cjelokupnog analitičkog postupka. Za općenite smjernice u vezi s kontrolom kvalitete korisnik može pogledati CLSI MM3 11 i EP

8 1. BD ne isporučuje vanjske kontrolne materijale. Vanjske pozitivne i negativne kontrole ne koriste se u softveru sustava BD MAX u svrhu interpretacije rezultata testnih uzoraka. Vanjske kontrole tretiraju se kao da su uzorci pacijenata. (Radi detaljnog tumačenja rezultata testiranja vanjskih kontrola, pogledajte tablicu u odjeljku Interpretacija rezultata. 2. Preporučuje se da se barem jednom dnevno izvode jedna (1) pozitivna vanjska kontrola i jedna (1) negativna vanjska kontrola dok se ne postigne zadovoljavajuća potvrda procesa u sustavu BD MAX u svim laboratorijskim okruženjima. Smanjivanje učestalosti kontrolnog testiranja treba se provesti u skladu s primjenjivim propisima. 3. Vanjska pozitivna kontrola namijenjena je za nadzor velike pogreške u vezi s reagensom. Vanjska negativna kontrola upotrebljava se za otkrivanje kontaminacije reagensa ili okoliša (ili prenošenja) putem nukleinskih kiselina. 4. Preporučuje se provoditi različite vanjske kontrole kako bi se korisniku omogućilo da odabere najprikladniju za program kontrole kvalitete u svom laboratoriju. a. Negativna vanjska kontrola: epruveta s puferom za uzorak BD MAX UVE bez dodatka organizama ili prethodno okarakteriziran uzorak za koji se zna da je negativan. BD preporučuje da se negativne vanjske kontrole pripreme prije pozitivne vanjske kontrole kako bi se smanjila mogućnost kontaminacije kao posljedica pripreme kontrole. b. Pozitivna vanjska kontrola: komercijalno dostupan kontrolni materijal [npr., Chlamydia trachomatis serovar H (ATCC VR-879), Neisseria gonorrhoeae (ATCC 19424)], Trichomonas vaginalis (ATCC 30001) ili prethodno karakteriziran uzorak za koji se zna da je pozitivan. Za pripremu vanjskih kontrolnih suspenzija preporučuje se da se nabavi zaliha stanica od ATCC-a i razrijedi u fosfatnom puferu do stupnja razrijeđenosti nadređene otopine od 10-6 za bakterije Chlamydia trachomatis serovar H i Neisseria gonorrhoeae te do krajnjeg stupnja razrijeđenosti nadređene otopine od 10-3 za Trichomonas vaginalis. ATCC-ove zalihe stanica Neisseria gonorrhoeae liofilizirane su i moraju se rehidrirati s 1 ml fosfatnog pufera prije razrjeđivanja. Zatim otopinu razrijedite tako da prebacite 150 µl epruvetu s puferom za uzorak BD MAX UVE da biste dobili konačnu koncentraciju od 10-7 za bakterije Chlamydia trachomatis i Neisseria gonorrhoeae te konačnu koncentraciju od 10-4 za Trichomonas vaginalis. 5. Sve vanjske kontrole trebaju dati očekivane rezultate (pozitivne za pozitivne vanjske kontrole i negativne za negativne vanjske kontrole) bez nevaljanih kontrola uzoraka (s nerazriješenim ili neodređenim rezultatima). 6. Vanjska negativna kontrola koja da pozitivan rezultat ukazuje na rukovanje uzorkom i/ili kontaminaciju. Vanjska pozitivna kontrola koja daje negativan rezultat ukazuje na probleme pri rukovanju uzorkom / pripremi. Razmotrite tehniku rukovanja uzorkom / pripreme. 7. Vanjska kontrola koja da nerazriješeni, neodređeni ili nepotpuni rezultat ukazuje na pogrešku reagensa ili sustava BD MAX. Pogledajte na monitoru sustava BD MAX ima li poruka o pogreškama. Pogledajte odjeljak Sažetak pogrešaka sustava u Korisničkom priručniku sustava BD MAX 9 radi tumačenja kodova upozorenja i pogrešaka. Ako se problem ne ukloni, upotrijebite reagense iz neotvorene vrećice ili novi komplet za testiranje. 8. Svaka od epruveta za izdvajanje sadrži kontrole obrade uzorka (SPC), odnosno plazmid sa sintetičkim ciljanim DNK slijedom. Kontrola obrade uzoraka nadgleda učinkovitost hvatanja DNK, pranja i eluiranja tijekom obrade uzoraka, kao i učinkovitost amplifikacije i otkrivanja DNK tijekom PCR analize. Ako rezultat kontrole obrade uzorka ne ispunjava kriterij prihvatljivosti, rezultati uzorka bilježe se kao nerazriješeni, međutim, svi pozitivni (POS) testovi prijavljuju se i nijedan od ciljeva ne smatra se NEG. Nerazriješeni rezultat indikativan je za inhibiciju povezanu s uzorkom ili pogreškom reagensa. Ponovite svaki uzorak prijavljen kao nerazriješen kako je opisano u odjeljku Ponavljanje postupka testiranja. INTERPRETACIJA REZULTATA Rezultati su dostupni na kartici Results (Rezultati) u prozoru Results (Rezultati) na monitoru sustava BD MAX. Sustav BD MAX automatski tumači rezultate testiranja. Rezultat testiranja može biti NEG (negativan), POS (pozitivan) ili UNR (nerazriješen) na temelju amplifikacijskog statusa cilja i kontrole obrade uzorka. IND (neodređeni) ili INC (nepotpuni) rezultati posljedica su pogreške u sustavu BD MAX. Rezultati se temelje na sljedećem algoritmu odluke: Prijavljeni rezultat testa CT POS CT NEG CT UNR GC POS GC NEG GC UNR TV POS TV NEG TV UNR IND INC Tablica 5: interpretacija rezultata testa BD MAX CT/GC/TV Interpretacija rezultata otkriven DNK Chlamydia trachomatis nije otkriven DNK Chlamydia trachomatis Neriješeno inhibitorni uzorak ili pogreška reagensa, nema cilja ili amplifikacije kontrole obrade uzorka otkriven DNK Neisseria gonorrhoeae nije otkriven DNK Neisseria gonorrhoeae Neriješeno inhibitorni uzorak ili pogreška reagensa, nema cilja ili amplifikacije kontrole obrade uzorka otkriven DNK Trichomonas vaginalis nije otkriven DNK Trichomonas vaginalis Neriješeno inhibitorni uzorak ili pogreška reagensa, nema cilja ili amplifikacije kontrole obrade uzorka Neodređeni rezultat kao posljedica pogreške u sustavu BD MAX (s kodovima upozorenja ili pogrešaka) a Nepotpuni test (s kodovima upozorenja ili pogrešaka) a a Pogledajte odjeljak Rješavanje problema u Korisničkom priručniku sustava 9 radi tumačenja kodova upozorenja i pogrešaka. PONAVLJANJE POSTUPKA TESTIRANJA NAPOMENA: epruveta s puferom za uzorak BD MAX UVE sadrži dovoljnu količinu za jedno ponavljanje testiranja u sustavu BD MAX. Ponovljeno testiranje mora se obaviti u vremenskom rasponu navedenom u tablici 3. Pohranjene uzorke dovedite na sobnu temperaturu i promiješajte kratko orbitalnom miješalicom prije testiranja u sustavu BD MAX. Uzorke ponovno testirajte počevši od odjeljka Rad sustava BD MAX. 8

9 NAPOMENA: novi se uzorci mogu testirati u istom krugu s ponovljenim uzorcima. NERAZRIJEŠE REZULTAT Nerazriješeni rezultat može se dogoditi u slučaju kada inhibitorna svojstva uzorka ili pogreška reagensa spriječe pravilnu amplifikaciju cilja ili kontrole obrade uzorka. Ako se kontrola obrade uzorka ne amplificira, uzorak se prijavljuje kao UNR, međutim, bit će zabilježeni svi pozitivni (POS) rezultati testa i nijedan cilj neće biti obilježen kao NEG. Sustav BD MAX izvješćuje o rezultatima individualno za svaki cilj, a rezultat UNR može se dobiti za jedan ili više ciljeva testa BD MAX CT/GC/TV. U slučaju potpunog UNR-a, kada svi ciljevi imaju rezultat UNR, test je neophodno ponoviti. U slučaju parcijalnog UNR-a, kada jedan ili više ciljeva imaju rezultat POS, a svi drugi ciljevi imaju rezultat UNR, preporučuje se da se test ponovi na dolje opisan način. U rijetkim slučajevima može doći do nepodudarnih rezultata kod ponavljanog testiranja za one ciljeve koji su inicijalno zabilježeni kao POS. Slijedite odgovarajući postupak u skladu s trenutačnim laboratorijskim procedurama. Uzorci se mogu ponoviti iz odgovarajućih epruveta s puferom za uzorak BD MAX UVE u prethodno definiranim vremenskim rasponima. Krenite iznova pridržavajući se uputa iz odjeljka Rad sustava BD MAX. NEODREĐE REZULTAT Neodređeni rezultat može se dobiti u slučaju kvara sustava. Uzorci se mogu ponoviti iz odgovarajućih epruveta s puferom za uzorak BD MAX UVE u prethodno definiranim vremenskim rasponima. Krenite iznova pridržavajući se uputa iz odjeljka Rad sustava BD MAX. Tumačenje kodova upozorenja ili pogrešaka potražite u Korisničkom priručniku sustava BD MAX 9 (Rješavanje problema). NEPOTPU REZULTAT Do nepotpunih rezultata može doći u slučaju da nije dovršena priprema uzorka ili PCR. Uzorci se mogu ponoviti iz odgovarajućih epruveta s puferom za uzorak BD MAX UVE u prethodno definiranim vremenskim rasponima. Krenite iznova pridržavajući se uputa iz odjeljka Rad sustava BD MAX. Tumačenje kodova upozorenja ili pogrešaka potražite u Korisničkom priručniku sustava BD MAX 9 (Rješavanje problema). POGREŠKA VANJSKE KONTROLE Vanjske kontrole trebale ti dati očekivani rezultat prilikom testiranja. Ako se uzorci moraju ponoviti zbog netočnog rezultata vanjske kontrole, treba ih ponoviti iz njihovih epruveta s puferom za uzorak BD MAX UVE zajedno sa svježe pripremljenim vanjskim kontrolama u prethodno definiranim vremenskim rasponima. Krenite iznova pridržavajući se uputa iz odjeljka Rad sustava BD MAX. OGRAČENJA POSTUPKA Test BD MAX CT/GC/TV ne može se koristiti za otkrivanje DNK Trichomonas vaginalis u uzorcima muškog urina. Uspješnost testa BD MAX CT/GC/TV potvrđena je samo za otkrivanje DNK Trichomonas vaginalis u uzorcima ženskog urina. Test BD MAX CT/GC/TV može izvoditi samo osoblje obučeno za rad na sustavu BD MAX. Namjena prikupljanja i testiranja urina i vaginalnih briseva koje su uzeli sami pacijenti testom BD MAX CT/GC/TV nije da zamijeni pregled cerviksa i uzimanje endocervikalnog uzorka radi dijagnosticiranja urogenitalne infekcije. Cervicitis, uretritis, infekcije urinarnih puteva i vaginalne infekcije mogu uzrokovati drugi uzroci ili može doći do više istodobnih infekcija. Test BD MAX CT/GC/TV za testiranje muškog i ženskog urina treba se izvoditi na prvom mlazu nasumičnog uzorka urina. Tijekom kliničke procjene u procjene izvedbe uključen je urin u količinama od 20 ml do 60 ml. Razrjeđujući učinak većih količina urina može rezultirati smanjenom osjetljivošću testa. Nisu utvrđeni učinci drugih varijabli, poput prikupljanja srednjeg mlaza. Test BD MAX CT/GC/TV nije potvrđen za prikupljanje uzoraka vaginalnog brisa od strane pacijentica kod kuće. Pouzdani rezultati analize ovise o adekvatnom prikupljanju uzorka. Slijedite postupke u ovom letku i kompletu za prikupljanje uzoraka BD MAX UVE. Nepoštivanje uputa za prikupljanje uzorka moglo bi dovesti do povećanja broja neprijavljivih rezultata. Lubrikanti i drugi proizvodi koji sadrže supstance kao što su karbomeri mogu povisiti stopu neprijavljivanja koja se dobiva testom BD MAX CT/GC/TV. Interferencija s testom BD MAX CT/GC/TV primijećena je kod matrice vaginalnog brisa u prisutnosti gela Aquagel (0,46 mg/ml), gela McKesson Lubricating Jelly (59,3 mg/ml), kontracepcijske pjene VCF / kontracepcijskog gela Conceptrol / aciklovira ( 25 μl/ml), kreme protiv vaginalnog svrbeža / metronidazola ( 2,5 μl/ml) i pune krvi ( 0,66 μl/ml). Interferencija s analizom BD MAX CT/GC/TV primijećena je za matricu urina u prisutnosti pune krvi (> 0,04 % v/v). Trichomonas tenax, komenzal usne šupljine, križno reagira s testom BD MAX CT/GC/TV na razinama iznad 10 stanica/ml. Pentatrichomonas hominis, komenzal debelog crijeva, križno reagira na razinama iznad 3,39 x 10 5 TV/mL. Nisu utvrđeni učinci drugih potencijalnih varijabli poput vaginalnog iscjetka, upotrebe tampona i varijabli prikupljanja uzoraka. Kao i s drugim dijagnostičkim testovima, rezultate testa BD MAX CT/GC/TV treba tumačiti u sprezi s ostalim laboratorijskim i kliničkim podacima koje liječnik ima na raspolaganju. Pogrešni rezultati testa mogu se javiti i zbog nepravilnog prikupljanja uzorka, nepravilnog rukovanja ili pohranjivanja, prisutnosti inhibitora, tehničke pogreške, pomiješanih uzoraka ili zbog toga što je broj organizama u uzorku manji od analitičke osjetljivosti testa. Ako test BD MAX CT/GC/TV daje rezultat IND, INC ili UNR (za jedan cilj ili više njih), potrebno ga je ponoviti. Rezultat testa BD MAX CT/GC/TV ne upućuje nužno na prisutnost vijabilnih organizama. Pozitivan rezultat ukazuje na prisutnost DNK Chlamydia trachomatis i/ili Neisseria gonorrhoeae i/ili Trichomonas vaginalis. Test BD MAX CT/GC/TV ne može se koristiti za procjenu terapeutskog učinka ili neučinka jer se nukleinske kiseline bakterija Chlamydia trachomatis te Neisseria gonorrhoeae i Trichomonas vaginalis mogu zadržati i nakon antibakterijske terapije. Lažni negativni rezultati mogu se pokazati zbog gubitka nukleinske kiseline zbog neprikladnog prikupljanja, transporta ili pohrane uzoraka ili zbog neodgovarajuće lize bakterijskih stanica. Kontrola obrade uzoraka dodana je testu kako bi pripomogla 9

10 u identifikaciji uzoraka koji sadrže inhibitore PCR amplifikacije. Kontrola obrade uzoraka ne pokazuje je li do gubitka nukleinske kiseline došlo zbog neprikladnog prikupljanja, transporta ili pohrane uzoraka, ni jesu li bakterijske stanice pravilno lizirane. Test BD MAX CT/GC/TV ne bi se trebao koristiti za procjenu sumnje u seksualno zlostavljanje ili za druge medicinsko-pravne indikacije. Dodatno testiranje preporučuje se u svakom slučaju kada lažno pozitivni ili lažno negativni rezultati mogu dovesti do opasnih medicinskih, društvenih ili psiholoških posljedica. Kao kod svih in vitro dijagnostičkih testova, pozitivne i negativne prediktivne vrijednosti vrlo su ovisne o učestalosti. Uspješnost testa BD MAX CT/GC/TV može varirati ovisno o testiranoj učestalosti i populaciji. Za test BD MAX CT/GC/TV potrebna su četiri (4) optička kanala sustava BD MAX: FAM kanal (475/520 nm), ROX kanal (585/630 nm), VIC kanal (530/565 nm) i Cy5 (630/665 nm). Izvedba ostalih optičkih kanala u ovom testu nije utvrđena. Kao i kod svih in vitro dijagnostičkih testova baziranih na PCR-u, moguće je detektirati iznimno niske razine ciljane tvari ispod granice opažanja ili LoD, ali rezultat možda neće biti moguće reproducirati. Ovo je kvalitativni test i ne daje kvantitativne vrijednosti, niti pokazuje u kojoj su količini organizmi prisutni. OČEKIVANE VRIJEDNOSTI Učestalost Učestalost uzoraka s pozitivnim rezultatom na prisutnost Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae i Trichomonas vaginalis ovisi o populaciji pacijenata. Čimbenici uključuju kliničku i dob pacijenta, faktore rizika, spol i način testiranja. U kliničkom ispitivanju BD MAX CT/GC/TV (srpanj svibanj 2014.) ukupno je ženskih ispitanica testa za bakteriju Chlamydia trachomatis i Neisseria gonorrhoeae te njih za bakteriju Trichomonas vaginalis bilo sukladno na razini subjekta i statusa inficiranosti pacijenta (PIS). U muškoj populaciji ukupno je 873 ispitanika testa za Chlamydia trachomatis i 876 ispitanika za Neisseria gonorrhoeae bilo sukladno na razini subjekta i statusa inficiranosti pacijenta (PIS). Ispitanici su prikupljeni s 8 različitih zemljopisnih lokacija. Dvije su lokacije obuhvatile samo ženske ispitanike. Tablica 6: učestalost u kliničkom ispitivanju BD MAX CT/GC/TV Spol Status simptoma Lokacija Chlamydia trachomatis Neisseria gonorrhoeae Trichomonas vaginalis 1 18,5 % (5/27) 7,4 % (2/27) 15,4 % (2/13) 2 8,5 % (5/59) 0,0 % (0/59) 24,1 % (7/29) 3 6,0 % (13/216) 0,9 % (2/216) 8,8 % (3/34) 4 1,8 % (2/113) 1,8 % (2/113) 2,2 % (1/45) Asimptomatski 5 1,2 % (1/81) 0,0 % (0/81) 10,9 % (5/46) 6 6,5 % (2/31) 0,0 % (0/31) 0,0 % (0/10) 7 9,1 % (23/254) 5,1 % (13/254) 9,8 % (13/133) 8 3,7 % (3/82) 3,7 % (3/82) 0,0 % (0/9) Sve 6,3 % (54/863) 2,5 % (22/863) 9,7 % (31/319) Žene 1 13,1 % (8/61) 3,3 % (2/61) 21,0 % (13/62) 2 9,4 % (10/106) 2,8 % (3/106) 17,2 % (15/87) 3 7,0 % (14/199) 1,0 % (2/199) 22,5 % (9/40) 4 4,3 % (2/47) 0,0 % (0/47) 8,7 % (2/23) Simptomatski 5 5,4 % (11/202) 1,0 % (2/202) 10,3 % (20/194) 6 2,9 % (2/70) 1,4 % (1/70) 24,1 % (14/58) 7 11,9 % (42/352) 5,7 % (20/352) 15,2 % (41/269) 8 10,0 % (9/90) 0,0 % (0/90) 39,4 % (13/33) Sve 8,7 % (98/1 127) 2,7 % (30/1 127) 16,6 % (127/766) Ukupno 7,6 % (152/1 990) 2,6 % (52/1 990) 14,6 % (158/1 085) 1 11,1 % (2/18) 0,0 % (0/18) 2 14,6 % (19/130) 0,8 % (1/132) Asimptomatski 4 8,8 % (3/34) 0,0 % (0/34) 6 9,4 % (6/64) 1,6 % (1/64) 7 18,2 % (42/231) 1,3 % (3/231) Sve 15,1 % (72/477) 1,0 % (5/479) Muškarci 1 37,4 % (34/91) 35,2 % (32/91) 2 24,2 % (37/153) 22,1 % (34/154) Simptomatski 4 50,0 % (4/8) 25,0 % (2/8) 6 22,9 % (8/35) 14,3 % (5/35) 7 27,5 % (30/109) 29,4 % (32/109) Sve 28,5 % (113/396) 26,4 % (105/397) Ukupno 21,2 % (185/873) 12,6 % (110/876) 10

11 Pozitivne i negativne prediktivne vrijednosti Izračunate su hipotetska pozitivna prediktivna vrijednost (PPV) i negativna prediktivna vrijednost (NPV) koje su predstavljene u tablicama 7 9 za bakterije Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae i Trichomonas vaginalis. Izračuni su temeljeni na hipotetskoj učestalosti u sveukupnoj osjetljivosti i specifičnosti u usporedbi sa statusom inficiranog pacijenta. Tablica 7: hipotetske pozitivne i negativne prediktivne vrijednosti za Chlamydia trachomatis u usporedbi sa statusom infekcije pacijenta Učestalost Osjetljivost Specifičnost PPV NPV 1 % 53,6 % 2 % 70,0 % 99,9 % 5 % 85,8 % 99,8 % 10 % 92,7 % 99,5 % 95,7 % (576/602) 99,2 % (5 696/5 744) 20 % 96,6 % 98,9 % 30 % 98,0 % 98,2 % 40 % 98,7 % 97,2 % 50 % 99,1 % 95,8 % Tablica 8: hipotetske pozitivne i negativne prediktivne vrijednosti za Neisseria gonorrhoeae u usporedbi sa statusom infekcije pacijenta Učestalost Osjetljivost Specifičnost PPV NPV 1 % 86,9 % 100,0 % 2 % 93,1 % 99,9 % 5 % 97,2 % 99,8 % 10 % 98,7 % 99,7 % 97,1 % (235/242) 99,9 % (6 098/6 107) 20 % 99,4 % 99,3 % 30 % 99,6 % 98,8 % 40 % 99,8 % 98,1 % 50 % 99,8 % 97,2 % Tablica 9: hipotetske pozitivne i negativne prediktivne vrijednosti za Trichomonas vaginalis u usporedbi sa statusom infekcije pacijenta Učestalost Osjetljivost Specifičnost PPV NPV 1 % 53,6 % 99,9 % 2 % 70,0 % 99,9 % 5 % 85,8 % 99,7 % 10 % 92,7 % 99,3 % 94,1 % (431/458) 99,2 % (2 654/2 676) 20 % 96,6 % 98,5 % 30 % 98,0 % 97,5 % 40 % 98,7 % 96,2 % 50 % 99,1 % 94,4 % KARAKTERISTIKE SVOJSTAVA Osam geografski različitih kliničkih lokacija u Sjevernoj Americi sudjelovalo je u kliničkom ispitivanju ocjene testa BD MAX CT/GC/TV. U dio ispitivanja koje se bavilo testiranjem na Chlamydia trachomatis i Neisseria gonorrhoeae bilo je uključeno dvije tisuće stotinu šezdeset i šest (2 166) ispitanica i 908 ispitanika iz ginekoloških ordinacija i klinika za spolno prenosive bolesti te klinika za planiranje obitelji. Od toga je ispitanica bilo uključeno u testiranje na Trichomonas vaginalis. Trudnice nisu bile isključene iz kliničkog ispitivanja. Ispitanici su klasificirani kao simptomatski ako su prijavili simptome poput dizurije, iscjetka iz mokraćovoda, svrbeža, mirisa, boli/krvarenja pri snošaju, otežanog snošaja, bolove/oticanje u testisima ili preponama, neuobičajeni vaginalni iscjedak ili bol u predjelu zdjelice/maternice. Ispitanici su klasificirani kao asimptomatski ako nisu prijavili navedene simptome. Konačna analiza podataka obuhvatila je ispitanica koje je bilo moguće ispitati za Chlamydia trachomatis i Neisseria gonorrhoeae, od čega je njih bilo ispitano za Trichomonas vaginalis. Kod muškaraca bilo je moguće ocijeniti 892 ispitanika u testovima na bakterije Chlamydia trachomatis i Neisseria gonorrhoeae. Za ispitanike koji su ispunili uvjete izvedba za Chlamydia trachomatis izračunata je na temelju vaginalnih briseva prikupljenih od strane pacijentica, endocervikalnih briseva, uzoraka ženskog urina i 830 uzoraka muškog urina. Uzorci za Neisseria gonorrhoeae koje je bilo moguće ocijeniti obuhvatili su vaginalnih briseva prikupljenih od strane pacijentica, endocervikalna brisa, uzoraka ženskog urina i 840 uzoraka muškog urina. Uzorci sukladni s Trichomonas vaginalis obuhvatili su vaginalnih briseva prikupljenih od strane pacijentica, endocervikalnih briseva i uzoraka ženskog urina. Izuzeci su uključili, ali nisu ograničeni na sljedeće: probleme s prijavom, izgubljene uzorke, pogreške u transportu, pogreške u prikupljanju, pogreške u otpremi, pogreške u obradi i/ili pogreške u radu sustava BD MAX. 11

12 Osam uzoraka prikupljeno je od svake prikladne ispitanice. Urin je prikupljen i raspodijeljen u epruvetu s puferom za uzorak BD MAX UVE za analizu pomoću testa BD MAX CT/GC/TV i za dva referentna uređaja za prikupljanje / testa uzoraka urina. Jedan uzorak vaginalnog brisa koji je dostavila pacijentica prenesen je u epruvetu s puferom za uzorak BD MAX UVE za testiranje testom BD MAX CT/GC/TV. Dva nasumična uzorka vaginalnog brisa koje uzima liječnik prikupljeni su za referentno testiranje na Trichomonas vaginalis, a tri nasumična uzorka endocervikalnog brisa prikupljeni su za sustav BD MAX i preneseni u epruvetu s puferom za uzorak BD MAX UVE za analizu putem testa BD MAX CT/GC/TV i dva referentna uređaja za prikupljanje / testa uzoraka urina. Po dva su uzorka prikupljena od svakog prikladnog ispitanika. Urin je raspodijeljen u epruvetu s puferom za uzorak BD MAX UVE za analizu testom BD MAX CT/GC/TV i za dva referentna testa / uređaja za prikupljanje uzoraka. Jedan uzorak brisa mokraćovoda prikupljen je i testiran referentnom metodom. Izvedba testa BD MAX CT/GC/TV izračunata je u usporedbi s PIS-om (pogledajte tablice 10 11). Komparativne referentne metode obuhvatile su dva različita komercijalno dostupna testa NAAT (test za amplifikaciju nukleinske kiseline) za ženske ispitanike i tri testa NAAT za muške ispitanike od barem 2 različite vrste uzoraka za bakterije Chlamydia trachomatis i Neisseria gonorrhoeae, kao i dva testa (kultura i mokri preparat) za Trichomonas vaginalis. Ispitanik se smatra zaražen bakterijom Chlamydia trachomatis i/ili Neisseria gonorrhoeae ako su barem dva različita referentna NAAT testa bila pozitivna za urin i endocervikalne brisove. Endocervikalne infekcije javljale su se kada je najmanje jedan od dvaju pozitivnih rezultata testa NAAT bio od endocervikalnog brisa. Ispitanik se smatra zaražen bakterijom Trichomonas vaginalis ako je barem jedan od referentnih rezultata (mokri preparat ili kultura) bio pozitivan. Oba referentna rezultata za Trichomonas vaginalis moraju biti negativna da bi se utvrdilo neinficirano stanje. Za izračun uspješnosti testa BD MAX CT/GC/TV u usporedbi s PIS-om korišteno je ukupno rezultata za Chlamydia trachomatis, rezultata za Neisseria gonorrhoeae i rezultata za Trichomonas vaginalis iz ocjenjivih testova BD MAX CT/GC/TV. Osjetljivost i specifičnost prema vrsti uzorka i statusu simptoma navedeni su u tablicama U tablicama sažeti su brojni rezultati testova za simptomatske i asimptomatske ispitanice koje se prema PIS algoritmima smatraju inficirane ili neinficirane bakterijom CT, GC ili TV. U tablicama 15 i 16 sažeti su brojni rezultati testova za simptomatske i asimptomatske ispitanike koje se prema PIS algoritmima smatraju inficirani ili neinficirani bakterijom CT ili GC. Spol Uzorak Simpt. Žene Muškarci Vaginalni bris Endocervikalni bris Urin Urin Tablica 10: opća izvedba u usporedbi s infektivnim statusom pacijenta A S SVE A S SVE A S SVE A S SVE Chlamydia trachomatis Neisseria gonorrhoeae Trichomonas vaginalis Osjetljivost Specifičnost Osjetljivost Specifičnost Osjetljivost Specifičnost 98,7 % 94,1 % 99,9 % 93,1 % 97,5 % (51/51) (734/744) (16/17) (777/778) (27/29) (270/277) 93, ,5 99,3 73,0 99,0 99, ,0 98,1 94,9 98,8 98,9 % 98,6 % 96,3 % 99,8 % 96,7 % 99,5 % (89/90) (938/951) (26/27) (1 012/1 014) (119/123) (616/619) 94,0 99,8 97,7 99,2 81,7 99,3 99,3 99,9 91,9 98,7 98,6 99,8 99,3 % 98,6 % 95,5 % 99,8 % 96,1 % 98,9 % (140/141) (1 672/1 695) (42/44) (1 789/1 792) (146/152) (886/896) 96,1 99,9 98,0 99,1 84,9 98,7 99,5 99,9 91,7 98,2 98,0 99,4 98,0 % 99,1 % 96,6 % 98,2 % (48/49) (739/746) (16/16) (778/778) (28/29) (270/275) 89,3 99,6 98,1 99,5 80, , ,8 99,4 95,8 99,2 98,8 % 99,4 % 96,3 % 99,9 % 92,7 % 99,8 % (84/85) (945/951) (26/27) (1 002/1 003) (114/123) (611/612) 93,6 99,8 98,6 99,7 81,7 99,3 99, ,7 96,1 99, ,5 % 99,2 % 97,7 % 99,9 % 93,4 % 99,3 % (132/134) (1 684/1 697) (42/43) (1 780/1 781) (142/152) (881/887) 94,7 99,6 98,7 99,6 87,9 99,6 99, ,3 96,4 98,5 99,7 92,3 % 99,7 % 88,9 % 99,5 % 93,1 % 98,2 % (48/52) (747/749) (16/18) (779/783) (27/29) (272/277) 81,8 97,0 99,0 99,9 67,2 96,9 98,7 99,8 78,0 98,1 95,8 99,2 91,1 % 99,4 % 99,9 % 92,8 % 99,8 % (82/90) (952/958) (28/28) (1 019/1 020) (116/125) (615/616) 83,4 95,4 98,6 99,7 87, , ,9 96,2 99, % a 99,5 % 957 % b 99,7 % 92,9 % 99,3 % (130/142) (1 699/1 707) (44/46) (1 798/1 803) (143/154) (887/893) 85,8 95,1 99,1 99,8 85,5 98,8 99,4 99,9 87,7 96,0 98,5 99,7 98,6 % 99,5 % 80,0 % (69/70) (378/380) (4/5) (447/447) ,3 99,7 98,1 99,9 37,6 96,4 99, ,6 % 99,3 % (105/111) (267/269) (103/103) (285/285) ,7 97,5 97,3 99,8 96, , ,1 % 99,4 % 99,1 % (174/181) (645/649) (107/108) (732/732) ,2 98,1 98,4 99,8 94,9 99,8 99,5 100 a Šest od 12 uzoraka urina lažno negativnih na CT bili su negativni i prema NAAT1 i NAAT 2 referentnim metodama za urin. b Jedan od 2 uzoraka urina lažno negativnih na GC bio je negativan i prema NAAT1 i NAAT 2 referentnim metodama za urin. 12